利用糖質(zhì)原料產(chǎn)L-絲氨酸菌株SYPS-062的代謝機(jī)制初探.pdf

1、江南大學(xué)碩士學(xué)位論文利用糖質(zhì)原料產(chǎn)L-絲氨酸菌株SYPS-062的代謝機(jī)制初探姓名：林琳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王正祥;許正宏20080601A b s t r a c tA b s t r a c tS Y P S 一0 6 2 w a s a l lL - s e d n ep r o d u c i n gs t r a i n ，w h i c hc a n d i r e c t l yp r o

2、 d u c e L - s e r i n ef r o ms u g a rs u b s t a n c e s ．A c c o r d i n g t o m o r p h o l o g y ，p h y s i o l o g ya n db i o c h e m i c a li d e n t i f i c a t i o n ( 1 6 Sr D N A ) ．t h e b a c t e r i a l S

3、 Y P S ．0 6 2W a si d e n t i f i e d a s C o r y n e b a c t e r i u mg l u t a m i c u m ．L ．s e d n em e t a b o l i cn e t w o r k o fC o r y n e b a c t e r i u mg l u t a m i c u mW a sc o n s t r u c t e dt o a n

4、a l y z eS Y P S ．0 6 2m e t a b o l i cf l u xd i s t r i b u t i o n ，a n d m e t a b o l i cf l u xa n a l y s i sW a su s e dt o a n a l y z e t h ek e y e n z y m eg e n e s i n ．d e p t h ．T h e r e s u l t sa r e

5、a sf o l l o w s ：1 、A c c o r d i n g t om o r p h o l o g y , p h y s i o l o g y a n d b i o c h e m i c a l i d e n t i f i c a t i o n ( 1 6 S r D N A ) ，t h eb a a e d a lS Y P S ．0 6 2 W a si d e n t i f i e d a s

6、C o r y n e b a c t e r i u m g l u t a m i c u m ．I no r d e rt o a n a l y z et h em e c h a n i s m o f L - s e r i n ea c c u m u l a t i o n i nS Y P S ．0 6 2 ．t h eg r o w t hc u r v e o f S Y P S ．0 6 2 i nn u t r

7、 i e n tb r o t h m e d i u m W a s d e t e r m i n e d ．2 、T h em e t a b o l i c n e t w o r k o f C o r y n e b a c t e r i u m g l u t a m i c u m W a sc o n s t r u c t e di nt h i ss t u d y ．U s i n gt h i s m o d

8、 e l ．t h e m e t a b o l i cf l u x d i s t r i b u t i o n s o f S Y P S ．0 6 2a n dA T C C l3 0 3 2 w e r ec a l c u l a t e d ，w h i c h w e r ed u r i n g t h er a p i ds y n t h e s i s s t a g eo f L ．s e r i n e

9、i nS Y P S ．0 6 2 a n d t h es a m ea g ei n A T C C 13 0 3 2 ．T h er e s u l t si n d i c a t e dt h a t o n l y6 ．4 ％m e t a b o l i cf l u xe n t e r e dt h eH M Pp a t h w a y o f S Y P S ．0 6 2 w h i l e 2 9 ．6 ％f o

10、 rA T C C l3 0 3 2 ．T h i sp r o v i d e da s u 銜c i e n te v i d e n c e t oa c c o u n t f o rt h e d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h et w o s t r a i n s ．T 1 1 ep h o s p h a t ep h o s p h o e n o l p y r u v

11、a t e ( P E P )n o d e s i n v o l v e d t h e a n a p l e r o s i s r e a c t i o n ，w h i c h i n d i c a t e d t h a t P E Pi s ak e y n o d e o fC o r y n e b a c t e r i u m g l u t a m i c u m ．I n a d d i t i o n

12、．G ．3 ．Pi S o n eo ft h em o s ti m p o r t a n tn o d e si n t oL —s e d n e m e t a b o l i c p a t h w a y ．T h e M F A r e s u l t sp r o v i d e d a t h e o t i c a lb a s i sf o r f u r t h e rs t u d y ．3 、B a s e

13、 do nt h em e t a b o l i cf l u x a n a l y s i so ft h et w oC o r y n e b a c t e r i u m g l u t a m i c u m ，t h ed i f f e r e n c e s i n m e t a b o l i c f l u x d i s t r i b u t i o n c o u l d b e o n e o f m

14、 a i n f a c t o r s o f L - s e r i n ea c c u m u l a t i o n ，w h i l es e r i n eh y d r o x y m e t h y l - t r a n s f e r a s e ，w h i c hi sr e l a t e dw i t ht h ed e g r a d a t i o no fL - s e r i n e a n dp

15、r o v i d et h e o n e ．c a r b o n u n i t f o r t h e c e l l g r o w t h ．i s ak e ye n z y m e i nC o r y n e b a c t e r i u m g l u t a m i c u m ．A c c o r d i n g l y , s e r i n eh y d r o x y m e t h y l - t r

16、a n s f e r a s eg e n eg l y A W a ss t u d i e d i n t h i s p a p e r ．C o m p a r e dw i t h C g l u t a m i c u mS Y P S - 0 6 2 ，t h e g l y Ag e n e sf r o mA T C C 13 0 3 2s h a r e d 9 9 ．5 4 ％h o m o l o g yi n

17、 n u c l e o t i d es e q u e n c e ．T h es p e c i f i c a c t i v i t y o f t h et w or e c o m b i n a n tS H M T i nE c o l ih a d l i n l ed i f f e r e n c e ．i n d i c a t e dt h a tg t y Ag e n e s w a sn o ta ni

18、 m p o r t a n t f a c t o ro f L —s e r i n e a c c u m u l a t i o ni nS Y P S ．0 6 2 ．K e yw o r d s ：L - s e r i n e ，C o r y n e b a c t e r i u m g l u t a m i c u m ，d i r e c t f e r m e n t a t i o n , b a c t e