基于中藥血清藥理學與血清藥物化學方法的頭花蓼抗炎藥效物質及作用機制研究.pdf

1、目的：通過探討頭花蓼含藥血清的抗炎作用、作用機制以及作用的物質基礎，了解頭花蓼的抗炎作用及其直接發(fā)揮藥效的物質。
　　方法:以血清藥理學和血清藥物化學為基本方法，以大鼠為含藥血清的供體，采用LPS誘導小鼠單核巨噬細胞（RAW264.7細胞）建立炎癥損傷模型，以NO、TNF-α釋放量為考察指標評價頭花蓼水提取物含藥血清（ PCWES）、水提醇沉提取物含藥血清（PCAWES）和水提醇沉沉淀物含藥血清（PCAPWES）的抗炎活性，篩選出

2、頭花蓼主要抗炎有效提取物。利用Griess試劑法檢測有效提取物含藥血清對細胞釋放一氧化氮（NO）的影響，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）探討含藥血清對細胞釋放炎癥因子（TNF-α、IL-6）的影響，同時通過實時熒光定量PCR（Real Time-PCR）研究相關炎癥因子基因（iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA）的表達水平，利用Western blot技術檢測NF-κB、MAPKs信號通路中關鍵蛋白（IκB-α、p65以及p38）的表達

3、情況。通過UHPLC-Q-TOF對頭花蓼含藥血清中的主要代謝產物進行分析，并以各含藥血清的質譜峰峰高為自變量，其相對應的炎癥因子TNF-α釋放抑制率為因變量，進行隨機森林回歸分析，找出對TNF-α釋放抑制率最為重要的色譜峰，并通過色譜峰的質譜數(shù)據(jù)分析和數(shù)據(jù)庫檢索，了解含藥血清中可能發(fā)揮藥效的物質。
　　結果：各提取物含藥血清均不同程度地顯著抑制LPS誘導的RAW264.7細胞釋放炎癥因子，其中PCAWES組藥效最強，NO和TNF-

4、α抑制率分別為17.60％和29.90%，顯著優(yōu)于其他含藥血清組（P<0.05）。PCAWES能劑量依賴性地抑制RAW264.7細胞釋放炎癥因子NO、TNF-α和IL-6（P<0.01或P<0.001），并顯著降低iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA的水平（P<0.001），降低炎癥信號NF-κB通路中pI-κBα蛋白的表達，抑制p65由胞漿轉移至核內（P<0.001），對MAPKs通路中p-p38的蛋白表達無顯著影響。頭花蓼含藥血