磷酸肌酸鈉對(duì)阿霉素?fù)p傷乳鼠心肌細(xì)胞GRP78 mRNA及miR-378-378-表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　探討磷酸肌酸鈉對(duì)阿霉素?fù)p傷乳鼠心肌細(xì)胞GRP78 mRNA、miR-378及miR-378*表達(dá)的影響。
　　方法：
　　選用健康新生1~3日齡的SD乳鼠（雌雄不拘），用酶聯(lián)合消化法（0.1％Ⅱ型膠原酶+0.1%胰蛋白酶）對(duì)新生乳鼠的心肌組織進(jìn)行消化，使細(xì)胞分離出來，用差速帖壁法除去主要干擾成分成纖維細(xì)胞，提高心肌細(xì)胞純度。將心肌細(xì)胞濃度調(diào)整到5×104個(gè)/ml，把培養(yǎng)箱條件設(shè)置為37℃、5%CO2，密閉培

2、養(yǎng)72小時(shí)。運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測乳鼠心室肌細(xì)胞特有的α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）鑒定心肌細(xì)胞的純度，然后隨機(jī)分為3組：
　?、僬?duì)照（CON）組：正常心肌細(xì)胞；
　?、诎⒚顾?fù)p傷組（DOX）組：正常心肌細(xì)胞+阿霉素3mg/L；
　?、哿姿峒∷徕c治療（CPS）組：正常心肌細(xì)胞+阿霉素3mg/L+磷酸肌酸鈉10mmol/L。使用電子顯微鏡（JEOL1200）分別對(duì)各組心肌細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行差異分析。各組原代培養(yǎng)乳

3、鼠心肌細(xì)胞的GRP78 mRNA、miR-378及miR-378*的含量運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time PCR）技術(shù)測定。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS20.0軟件進(jìn)行處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1、與正常對(duì)照組相比較，阿霉素?fù)p傷組乳鼠心肌細(xì)胞線粒體腫脹和空泡化頻繁多見，肌原纖維排列紊亂，溶解破壞，片狀消失，細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)破壞程度嚴(yán)重；與阿霉素?fù)p傷組相比，磷酸肌酸鈉治療組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的破壞程度顯著減輕，

4、基本趨于正常。
　　2、與正常對(duì)照組相比較，阿霉素?fù)p傷組心肌細(xì)胞GRP78 mRNA表達(dá)明顯增加(p<0.01)；與阿霉素?fù)p傷組相比較，磷酸肌酸鈉治療組心肌細(xì)胞GRP78 mRNA表達(dá)減少(p<0.05)。
　　3、與正常對(duì)照組相比較，阿霉素?fù)p傷組心肌細(xì)胞miR-378及miR-378*表達(dá)減少(p<0.05)；與阿霉素?fù)p傷組相比較，磷酸肌酸鈉治療組心肌細(xì)胞miR-378及miR-378*表達(dá)增加(p<0.05)。