乳腺癌免疫微環(huán)境研究及預(yù)后相關(guān)性分析.pdf

1、本文主要從以下幾個部分進行論述：
　　第一部分
　　目的：
　　腫瘤免疫微環(huán)境在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。本研究希望通過分析免疫微環(huán)境中的一些免疫學(xué)指標在不同類型乳腺癌中的表達差異，來探討免疫微環(huán)境與乳腺癌的關(guān)系，為進一步的預(yù)后分析和免疫治療提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　方法：
　　根據(jù)納入排除標準收集2008年01月至2012年12月首次于長征院普外科行乳腺癌手術(shù)治療的256例乳腺癌患者的臨床病理、隨訪資料

2、及石蠟組織標本。應(yīng)用組織芯片技術(shù)和免疫組化的實驗方法對6種免疫學(xué)標記物進行檢測，分別記錄腫瘤細胞及腫瘤間質(zhì)細胞表達的程序死亡性配體-1(programmed death ligand-1，PD-L1)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor，TGF-1）的陽性細胞百分率、程序性死亡受體-1(programmed death-1，PD-1)、細胞毒性T細胞抗原-4（Cytotoxic T cell ant

3、igen-4，CTLA-4）、伽馬干擾素（interferon-Y，IFN-γ的陽性細胞百分率以及腫瘤上皮內(nèi)、瘤內(nèi)間質(zhì)FOXP3+淋巴細胞的浸潤密度。以5％為cut-off值將PD-L1、PD-1分成陽性表達、陰性表達兩組，以最小p值法計算其他指標的cut-off值并分別將其分為高表達（或高密度浸潤）、低表達（或低密度浸潤）兩組;進而分析不同年齡、腫瘤大小、腋窩淋巴結(jié)狀態(tài)、Ki-67表達、ER、PR、HER-2、分子分型、病理分期的乳腺

4、癌之間各指標的表達差異。
　　結(jié)果：
　　1、共可獲得205例PD-L1，200例PD-1、IFN-γ及TGF-β1，199例CTLA-4，194例FOXP3+淋巴細胞。
　　2、PD-1、腫瘤細胞及瘤內(nèi)間質(zhì)細胞表達的PD-L1的陽性表達率分別為52％、81.46％、49.76％; CTLA-4、IFN-γ、腫瘤細胞及瘤內(nèi)間質(zhì)細胞表達的TGF-β1的高表達率分別為56.06％、63.5％、88％、10.5％。在乳腺癌上

5、皮內(nèi)浸潤的FOXP3+淋巴細胞密度的均值為(2.73±3.77)個/0.0625mm2，中位數(shù)為1.5個，范圍是(0～20.50)個;在乳腺癌瘤內(nèi)間質(zhì)浸潤的FOXP3+淋巴細胞密度的均值為(15.14±15.08)個/0.0625mm2。
　　3、腫瘤細胞表達的PD-L1在ER陰性乳腺癌中陽性表達率為27.14％，顯著高于ER陽性乳腺癌(P=0.0261); HER-2陽性乳腺癌中PD-L1陽性表達率為26.39％，顯著高于HER

6、-2陰性乳腺癌(P=0.0483)。瘤內(nèi)間質(zhì)細胞表達的PD-L1在ER陰性乳腺癌中的陽性表達率為68.57％，顯著高于ER陽性乳腺癌(P=0.0002);在PR陰性乳腺癌中的陽性表達率為62.20％，顯著高于PR陽性乳腺癌(P=0.0065);在HER-2陽性乳腺癌中瘤內(nèi)間質(zhì)細胞表達的PD-L1陽性表達率為63.89％，顯著高于HER-2陰性乳腺癌(P=0.0067)。
　　4、腫瘤細胞表達的TGF-β1，在ER陰性乳腺癌中高表達

7、率為97.10％，顯著高于ER陽性乳腺癌(P=0.0109);相比于PR陽性乳腺癌，PR陰性乳腺癌的TGF-β1高表達率(96.34％)更高(P=0.0059)。浸潤在腫瘤間質(zhì)的淋巴細胞上的TGF-β1在不同類型乳腺癌間的表達均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　5、浸潤在乳腺癌腫瘤間質(zhì)中淋巴細胞上的PD-1在不同類型乳腺癌間的表達均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　6、在患者年齡＜50歲的乳腺癌中，腫瘤上皮內(nèi)高密度浸潤F

8、OXP3+淋巴細胞的比例為23.75％，顯著高于患者年齡≥50歲的乳腺癌(P=0.0392);在Ki-67≥14％的乳腺癌中，腫瘤上皮內(nèi)高密度浸潤FOXP3+淋巴細胞的乳腺癌所占比例為20％，高于Ki-67＜14％的乳腺癌(P=0.0460);在ER陰性乳腺癌中，腫瘤上皮內(nèi)FOXP3+淋巴細胞高密度浸潤比例為25.76％，顯著高于ER陽性乳腺癌(P=0.0237);在ⅢB～ⅢC的乳腺癌中，腫瘤上皮內(nèi)高密度浸潤FOXP3+淋巴細胞的比例(

9、32.00％)亦顯著高于Ⅰ～ⅢA的乳腺癌(P=0.0379)。
　　7、在ER陰性乳腺癌中，瘤內(nèi)間質(zhì)浸潤的淋巴細胞表達的CTLA-4，其高表達百分比為66.67％，顯著高于ER陽性乳腺癌(P=0.0256);在PR陰性乳腺癌中，則其高表達百分比為64.20％，高于PR陽性乳腺癌(P=0.0256)。
　　8、在IDC的組織學(xué)類型中，瘤內(nèi)間質(zhì)浸潤的淋巴細胞表達的IFN-γ，其高表達率為65.59％，而在其他組織學(xué)類型中為35.

10、71％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0332);在ER陰性的乳腺癌中，IFN-γ的高表達率為73.53％，而在ER陽性的乳腺癌中為58.78％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=58.78)。
　　結(jié)論：
　　1、PD-L1在乳腺癌腫瘤細胞上的表達，與ER陰性、HER-2陽性相關(guān);而PD-L1在乳腺癌瘤內(nèi)間質(zhì)細胞上的表達，與ER陰性、PR陰性、HER-2陽性相關(guān);
　　2、TGF-β1在腫瘤細胞上的表達，與ER陰性、PR陰性相關(guān);<

11、br>　　3、乳腺癌中PD-1的表達與各臨床病理因素均無相關(guān)性;
　　4、乳腺癌腫瘤上皮內(nèi)FOXP3+淋巴細胞高密度浸潤，與年齡＞50歲、Ki-67≥14％、ER陰性、病理分期ⅢB～ⅢC期相關(guān)。而乳腺癌瘤內(nèi)間質(zhì)中高密度浸潤FOXP3+淋巴細胞與IDC、ER陰性、PR陰性、HER-2陽性相關(guān);
　　5、乳腺癌微環(huán)境中浸潤的淋巴細胞上CTLA-4的高表達與ER陰性、PR陰性相關(guān);
　　6、乳腺癌微環(huán)境中淋巴細胞IFN-γ的

12、高表達與ER陰性、IDC相關(guān)。
　　第二部分
　　目的：
　　乳腺癌的預(yù)后與腫瘤免疫微環(huán)境密切相關(guān)。本部分研究旨在篩選出乳腺癌免疫微環(huán)境中與乳腺癌預(yù)后相關(guān)的免疫標記物，并進一步分析主要在哪些類型的乳腺癌中具有預(yù)后作用。
　　方法：
　　實驗方法同第一部分，采用COX單因素分析各個免疫學(xué)指標與DFS的關(guān)系;采用COX多因素分析篩選出DFS的獨立預(yù)后指標;按臨床病理因素分層，采用log-rank檢驗在每一層中分

13、析篩選出來的指標與DFS的關(guān)系。本部分還分析了PD-1表達與IFN-γ表達之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1、COX單因素分析中，乳腺癌淋巴細胞表面PD-1陽性表達較陰性表達的DFS生存時間相對更長（RR=0.53，95％CI0.29～0.99，P=0.0453）;相比于FOXP3+淋巴細胞在乳腺癌腫瘤間質(zhì)內(nèi)的低密度浸潤，高密度浸潤者的DFS生存時間相對更長(RR=2.35,95％CI:1.00～5.53, P=0.0500

14、)。
　　2、COX多因素分析中，淋巴細胞中的PD-1陽性表達與DFS呈顯著正相關(guān)(OR=0.47，95％CI:0.25～0.89);瘤內(nèi)間質(zhì)FOXP3+淋巴細胞高密度浸潤是DFS的獨立危險因素(OR=2.76，95％CI:1.07，7.09)。
　　3、分層分析中，在年齡≥50歲的患者中，淋巴細胞PD-1陽性表達者較陰性表達者，其DFS生存時間相對更長(P=0.014)，在IDC的患者中，淋巴細胞PD-1陽性表達者較陰性表

15、達者，其DFS生存時間相對更長(P=0.045);在PR陽性的患者中，淋巴細胞PD-1陽性表達者較陰性表達者，其DFS生存時間相對更長(P=0.009);在HER-2陽性的患者中，淋巴細胞PD-1陽性表達者較陰性表達者，其DFS生存時間相對更長(P=0.0224);在非三陰型乳腺癌的患者中，淋巴細胞PD-1陽性表達者較陰性表達者，其DFS生存時間相對更長(0.0327);在Ⅰ～ⅢA期乳腺癌的患者中，淋巴細胞PD-1陽性表達者較陰性表達者

16、，其DFS生存時間相對更長(P=0.0238)。在年齡＜50歲的患者中，F(xiàn)OXP3+淋巴細胞在乳腺癌間質(zhì)中高密度浸潤較低密度浸潤患者的DFS生存時間相對更長(P=0.009);在HER-2陰性的患者中，表達FOXP3+的淋巴細胞在乳腺癌間質(zhì)中高密度浸潤較低密度浸潤的DFS生存時間相對更長(P=0.009);在非三陰型乳腺癌患者中，F(xiàn)OXP3+淋巴細胞在乳腺癌間質(zhì)中高密度浸潤相對低密度浸潤的DFS生存時間相對更長(P=0.0412)。

17、r>　　4、進一步研究發(fā)現(xiàn)IFN-γ高表達與PD-1陽性率呈正向相關(guān)(OR=2.67，95％CI:1.45～4.92) P=0.0017)。
　　結(jié)論：
　　1、乳腺癌中PD-1的表達是DFS的獨立預(yù)后因素，兩者存在正向相關(guān)關(guān)系;
　　2、瘤內(nèi)間質(zhì)浸潤的FOXP3+淋巴細胞是DFS的獨立危險因素;
　　3、在年齡≥50歲、在IDC、PR陽性、HER-2陽性、非三陰型、Ⅰ～ⅢA期的乳腺癌患者中，PD-1陽性表達與D