腹腔鏡超聲引導(dǎo)下肝癌射頻消融術(shù)的應(yīng)用要點(diǎn)和miR-130a與肝細(xì)胞癌遷移侵襲關(guān)系的研究.pdf

1、目的:
　　1、總結(jié)腹腔鏡超聲引導(dǎo)下肝癌射頻消融術(shù)的技術(shù)要點(diǎn)，分析應(yīng)用特點(diǎn)、并發(fā)癥原因和防治方法及預(yù)后。
　　2、探討三維重建術(shù)前規(guī)劃對(duì)腹腔鏡超聲引導(dǎo)下肝癌射頻消融術(shù)的意義。
　　3、研究一種microRNA(微小RNA)——miR-130a在肝癌組織中的表達(dá)及對(duì)肝癌遷移侵襲的影響。
　　方法:
　　1、通過(guò)回顧性研究的方式研究本中心10年905例行LRFA術(shù)患者的臨床資料、手術(shù)方式、術(shù)后情況和生存時(shí)間等，

2、總結(jié)分析肝癌LRFA技術(shù)的應(yīng)用特點(diǎn)、并發(fā)癥原因和防治方法及預(yù)后。
　　2、通過(guò)配對(duì)研究的方式研究本中心24個(gè)月內(nèi)32例通過(guò)三維重建術(shù)前規(guī)劃指導(dǎo)LRFA的病例資料(同第一部分)，評(píng)價(jià)三維重建術(shù)前規(guī)劃對(duì)肝癌LRFA技術(shù)的意義。
　　3、通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR、構(gòu)建載體下調(diào)表達(dá)、Transwell、Western Blotting等分子生物學(xué)方法，在肝癌組織標(biāo)本和高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞株中研究miR-130a在肝癌組織中的表達(dá)及對(duì)肝癌遷移侵

3、襲的影響。
　　結(jié)果:
　　第一部分:
　　1.肝癌的LRFA治療是肝癌綜合治療越來(lái)越重要的一部分，病例數(shù)量逐年增加。2006-2010年組患者在把LRFA作為肝癌的首次治療手段的例數(shù)較少、肝功能Child-PughB或C級(jí)比例較高、腫瘤＞30mm比例較大(均P＜0.05)。相對(duì)于經(jīng)皮RFA，更適合行LRFA的適應(yīng)癥包括:①腫瘤位于肝臟表面，或外生性生長(zhǎng);②腫瘤較大，需多次、多針消融;③或緊鄰空腔臟器、膈肌(位于肝臟膈

4、頂部)、膽囊、心臟、第一肝門重要管道結(jié)構(gòu)。
　　2.使用術(shù)后一個(gè)月增強(qiáng)影像學(xué)的消融區(qū)描述腫瘤是否完全滅活。89.72％(812例)患者參加了術(shù)后1個(gè)月的回訪，總首次消融完全率87.31％。2006-2010年組和2011-2015年組兩組患者首次消融完全率(81.41％，92.17％)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。Logistic多因素回歸分析顯示:在單因素分析顯示與LRFA首次消融完全率有關(guān)的10個(gè)因素中，僅有①是否危險(xiǎn)部

5、位(OR=3.225，P=0.000)、②肝硬化(OR=1.110，P=0.040)、③肝功能Child-Pugh評(píng)級(jí)(P=0.000)、④術(shù)腫瘤最大徑(P=0.000)、⑤腫瘤數(shù)目(P=0.001)是首次消融完全率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　3.兩組患者的病理活檢比例、活檢陽(yáng)性率(53.62％，74.82％)都較低。2006-2010年組患者術(shù)后住院時(shí)間較長(zhǎng)(P＜0.001)、術(shù)后ALT變化較明顯(P=0.011)。
　　4.并

6、發(fā)癥的發(fā)生率方面，Clavien-DindoⅠ-Ⅱ級(jí)并發(fā)生的發(fā)生率兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，2011-2015年組患者Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)并發(fā)癥發(fā)生率較低(P=0.033，P=0.029)。由于LRFA在腹腔鏡直視下操作，腹腔出血(18/905)、氣胸(15/905)、膽漏(4/905)等并發(fā)癥發(fā)生率不高。腫瘤的種植轉(zhuǎn)移(4/905)應(yīng)通過(guò)減少穿刺次數(shù)及增加保護(hù)措施等方法避免。
　　5.576例患者參加了術(shù)后3個(gè)月以上的回訪，回訪時(shí)間3-60個(gè)月。

7、本組患者中位無(wú)瘤生存時(shí)間(Median disease free survival， Median DFS)為23.0個(gè)月，12個(gè)月、24個(gè)月、36個(gè)月的總腫瘤復(fù)發(fā)率分別達(dá)38.24％、50.87％、52.44％?；颊叩目偵鏁r(shí)間均較長(zhǎng)，12個(gè)月、24個(gè)月、36個(gè)月的總生存率分別達(dá)93.00％、87.00％、62.03％。Cox回歸分析顯示:在單因素分析顯示與LRFA術(shù)后DFS有關(guān)的10個(gè)因素中，僅有①是否危險(xiǎn)部位(RR=2.130，P

8、=0.012)、②是否為轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)性肝癌(RR=3.488，P=0.003)、③肝功能Child-Pugh評(píng)級(jí)(P=0.000)、④腫瘤最大徑(P=0.000)、⑤腫瘤數(shù)目(P=0.001)、⑥術(shù)前存在梗阻性黃疸(RR=1.633，P=0.031)、⑦術(shù)前存在門靜脈癌栓(RR=2.311，P=0.005)、⑧合并糖尿病(RR=1.168，P=0.028)均是研究對(duì)象行LRFA后DFS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。肝癌LRFA術(shù)后無(wú)瘤生存期、遠(yuǎn)期生存率

9、正在逐步提高。
　　第二部分:
　　1、32例行三維重建術(shù)前規(guī)劃、并按規(guī)劃行腹腔鏡超聲引導(dǎo)下肝癌射頻消融術(shù)(3D-LRFA)的患者，對(duì)應(yīng)其診斷、腫瘤部位、肝硬化程度、乙肝背景，配對(duì)同期開(kāi)展的未經(jīng)術(shù)前三維重建規(guī)劃的腹腔鏡超聲引導(dǎo)下肝癌射頻消融術(shù)(LRFA)的患者64例。3D-RFA組與LRFA組相比，手術(shù)時(shí)間明顯縮短(P=0.0023)，術(shù)中出血量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.1813)，平均進(jìn)針時(shí)間明顯縮短(P=0.0214)。

10、r>　　2.兩組首次消融符合率(P=0.871)、術(shù)后Clavien-DindoⅠ-Ⅱ級(jí)和Ⅲ-Ⅳ級(jí)并發(fā)癥發(fā)生率(P=0.659，P=0.458)并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但3D-LRFA組術(shù)后住院時(shí)間較短(P=0.0160)、術(shù)后ALT變化程度較小(P=0.0477)、術(shù)后TNF-α水平較低(P=0.0273)。
　　3.兩組患者的無(wú)瘤生存期(DFS)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0442)。3D-LRFA組和LRFA組患者12個(gè)月無(wú)瘤生存率分

11、別為77.636％和65.736％，LRFA組患者中位無(wú)瘤生存期為16個(gè)月，而3D-LRFA組大于24個(gè)月。
　　4、通過(guò)三維重建術(shù)前規(guī)劃構(gòu)建了腹腔鏡超聲引導(dǎo)肝癌射頻消融治療的規(guī)范化路徑，通過(guò)規(guī)范化路徑行肝癌LRFA治療能夠縮短外科醫(yī)生學(xué)習(xí)曲線。
　　第三部分:
　　1.miR-130a在肝癌組織中的表達(dá)要顯著高于對(duì)應(yīng)的癌旁組織(P=0，001)，miR-130a在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)也明顯高于正常肝細(xì)胞(P=0，000

12、)。
　　2.Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組細(xì)胞相比，通過(guò)miR-130a inhibitor降低miR-130a水平的高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞系(MHCC97-H、HCCLM3)的侵襲和轉(zhuǎn)移的能力明顯降低(P值分別為0.0004、0.0001、0.0002、0.0005)。
　　3.Western Blotting顯示下調(diào)miR-130a水平的MHCC97-H、HCCLM3兩種肝癌細(xì)胞中MMP-9和MMP-2的表達(dá)水平均

13、明顯下降，Western Blotting條帶灰度明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.003、0.004、0.000、0.006)。本研究證實(shí)miR-130a可以通過(guò)一定的信號(hào)通路和分子機(jī)制促進(jìn)肝癌細(xì)胞EMT的過(guò)程。
　　結(jié)論:
　　1.由于LUS具有緊貼肝臟腫瘤表面掃描、分辨率較高的特點(diǎn)，以及腹腔鏡下能夠直視操作治療過(guò)程、處理突發(fā)狀況的優(yōu)勢(shì)，LRFA作為肝癌經(jīng)皮超聲引導(dǎo)消融的有益補(bǔ)充，能夠降低術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率，增加手術(shù)的

14、安全性，體現(xiàn)了精準(zhǔn)、微創(chuàng)的治療理念及良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。對(duì)于一些無(wú)法切除的小肝癌，腫瘤毗鄰肝內(nèi)較大管道系統(tǒng)或肝臟周圍臟器，尤其合并肝硬化門脈高壓癥的患者，LRFA既是很好的手術(shù)治療方案，也是肝移植等待期的橋接方案。但LRFA的廣泛開(kāi)展仍需要較高的腹腔鏡肝臟外科技巧和腹腔鏡超聲技術(shù)。
　　2.基于患者真實(shí)影像信息的肝臟重建模型是肝臟外科手術(shù)規(guī)劃中有力的工具，其可在術(shù)前模擬患者腫瘤位置和重要管道結(jié)構(gòu)、規(guī)劃介入治療方案，從而縮短肝癌LR