Nanog介導(dǎo)FSH誘導(dǎo)卵巢癌的轉(zhuǎn)移和侵襲.pdf

1、目的：探討Nanog在卵巢癌組織中的表達(dá)，以及FSH誘導(dǎo)的卵巢癌轉(zhuǎn)移和侵襲中的作用。方法：使用western blot檢測(cè)永生化卵巢上皮細(xì)胞Moody，良性卵巢腫瘤細(xì)胞Mcv152和卵巢癌細(xì)胞Hey，Ho8910，SKOV3中Nanog的表達(dá)。使用FSH以濃度梯度和時(shí)間梯度的方式處理SKOV3細(xì)胞，western blot檢測(cè)Nanog蛋白表達(dá)。使用FSH處理si-Con或si-Nanog轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)設(shè)4組:對(duì)照組（C

2、on+si-Con，Con+si-Nanog），實(shí)驗(yàn)組（FSH+si-Con，F(xiàn)SH+si-Nanog）。使用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)四組細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲的能力，western blot分析四組細(xì)胞中Nanog的蛋白表達(dá)。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Nanog在卵巢癌組織中的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果：卵巢癌細(xì)胞系Hey，Ho8910，SKOV3中Nanog的表達(dá)明顯高于永生化和良性卵巢上皮細(xì)胞系（P＜0.05）。FSH上調(diào)Nanog的

3、表達(dá)以濃度和時(shí)間依賴的方式。對(duì)于遷移和侵襲能力，對(duì)照組（Con+si-Con，Con+si-Nanog）明顯低于實(shí)驗(yàn)組（FSH+si-Con，F(xiàn)SH+si-Nanog）（P＜0.05）。卵巢癌組織中的Nanog表達(dá)水平明顯高于正常卵巢組織（P＜0.05），Nanog蛋白表達(dá)與卵巢癌轉(zhuǎn)移相關(guān)。結(jié)論：Nanog是FSH重要的下游靶基因，介導(dǎo)FSH誘導(dǎo)的卵巢癌轉(zhuǎn)移作用。
　　第一部分Nanog在不同類型卵巢細(xì)胞株中的表達(dá)及調(diào)控
　

4、　目的：選取合適的卵巢癌細(xì)胞株作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株，檢測(cè)Nanog在不同類型卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)情況；研究卵泡刺激素（FSH）對(duì)Nanog表達(dá)的調(diào)控作用。
　　方法：（1）通過Western blotting技術(shù)檢測(cè)永生化上皮性卵巢細(xì)胞株Moody，良性卵巢腫瘤細(xì)胞株Mcv-152及上皮性卵巢癌細(xì)胞株Hey、Ho8910和SKOV3中Nanog的蛋白表達(dá)的情況。
　?。?）使用不同濃度（Con，5mIU/ml，25mIU/ml，50

5、mIU/ml，100mIU/ml）的卵泡刺激素（FSH）刺激上皮性卵巢癌細(xì)胞株SKOV3，使用Western blotting檢測(cè)Nanog蛋白的表達(dá)情況；使用50mIU/ml的FSH于不同時(shí)間（Con，3h，6h，12h，24h）刺激卵巢癌細(xì)胞株SKOV3，Western blotting檢測(cè)Nanog的蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　?。?）Nanog在上皮性卵巢癌細(xì)胞株 Hey(1.659±0.09)，Ho8910(1

6、.659±0.075)和SKOV3(2.130±0.129)中的表達(dá)明顯高于永生化的正常卵巢上皮細(xì)胞株 Moody(0.678±0.06)和良性卵巢腫瘤細(xì)胞株 Mcv-152(1.371±0.073)。Hey、Ho8910和SKOV3細(xì)胞株的Nanog表達(dá)相對(duì)于Moody的Nanog表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006，P=0.004,P=0.004）。SKOV3的Nanog表達(dá)相對(duì)于Mcv-152的Nanog表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

7、
　　（2）在一定濃度范圍內(nèi)，F(xiàn)SH能顯著上調(diào)上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3中Nanog的蛋白表達(dá)，而且以劑量依賴的方式，在FSH濃度為50mIU/ml上調(diào)作用最明顯。
　　（3）在一定時(shí)間范圍內(nèi)（24h），F(xiàn)SH能顯著上調(diào)上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3中Nanog的蛋白表達(dá)，作用方式呈時(shí)間依賴的方式。
　　結(jié)論：
　?。?）相對(duì)正常卵巢或者卵巢良性腫瘤細(xì)胞，Nanog在卵巢癌細(xì)胞中表達(dá)明顯上調(diào)。
　?。?）在一定

8、濃度和時(shí)間范圍內(nèi)，F(xiàn)SH能夠顯著上調(diào)卵巢癌細(xì)胞 SKOV3中Nanog的蛋白表達(dá)水平。
　　第二部分Nanog介導(dǎo)FSH誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲
　　目的：探索Nanog在FSH誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲中的作用。
　　方法：以上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3為研究對(duì)象，用RNA干擾技術(shù)敲除Nanog在SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)，處理分為四組：Con+si-Con，F(xiàn)SH+si-Con，Con+si-Nanog和FSH+si-

9、Nanog，同時(shí)使用FSH刺激并設(shè)立對(duì)照。使用劃痕實(shí)驗(yàn)(wound healing assay)檢測(cè)干擾Nanog后，檢測(cè)FSH對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3遷移能力的影響。使用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)(Transwell invasion assay)檢測(cè)干擾Nanog后，檢測(cè)FSH對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：（1）FSH刺激明顯增加SKOV3細(xì)胞遷移能力（P＜0.05），使用si-Nanog干擾Nanog表達(dá)，

10、明顯減弱了FSH誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移（P＜0.05）。Con+si-Nanog（0.815±0.028）組細(xì)胞遷移距離相對(duì)于Con+si-Con（0.670±0.021）組細(xì)胞遷移距離具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.02）。FSH+si-Nanog（0.710±0.020）組細(xì)胞遷移距離相對(duì)于FSH+si-Con（0.355±0.025）組細(xì)胞遷移距離具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004）。
　?。?）FSH處理顯著增加卵巢癌SKOV3細(xì)胞的侵襲能力

11、（P＜0.05），干擾Nanog表達(dá)，明顯阻斷了FSH誘導(dǎo)的卵巢癌增加的侵襲能力（P＜0.05）。Con+si-Nanog（2.5±0.7）組細(xì)胞侵襲能力相對(duì)于Con+si-Con（9±1.5）組細(xì)胞侵襲能力具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.028）。FSH+si-Nanog（10±1.6）組細(xì)胞侵襲能力相對(duì)于FSH+si-Con（25±1.3）組細(xì)胞侵襲能力具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.008）。
　　結(jié)論：在上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3中，Na

12、nog介導(dǎo)FSH誘導(dǎo)的上皮性卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲。
　　第三部分Nanog在卵巢組織中表達(dá)與卵巢癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系
　　目的：檢測(cè)Nanog在正常卵巢組織和卵巢癌組織中的表達(dá)，并分析其在卵巢癌組織中的表達(dá)與相關(guān)臨床病理資料的關(guān)系。
　　方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)5例正常卵巢組織和60例卵巢癌組織中Nanog的表達(dá)情況，比較兩種組織中Nanog表達(dá)的差異，并通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析其在卵巢癌組織中的表達(dá)與相關(guān)臨床病理資料的關(guān)