Nanog介導FSH誘導卵巢癌的轉移和侵襲.pdf

1、目的：探討Nanog在卵巢癌組織中的表達，以及FSH誘導的卵巢癌轉移和侵襲中的作用。方法：使用western blot檢測永生化卵巢上皮細胞Moody，良性卵巢腫瘤細胞Mcv152和卵巢癌細胞Hey，Ho8910，SKOV3中Nanog的表達。使用FSH以濃度梯度和時間梯度的方式處理SKOV3細胞，western blot檢測Nanog蛋白表達。使用FSH處理si-Con或si-Nanog轉染卵巢癌SKOV3細胞，實驗設4組:對照組（C

2、on+si-Con，Con+si-Nanog），實驗組（FSH+si-Con，F(xiàn)SH+si-Nanog）。使用劃痕實驗和Transwell侵襲實驗檢測四組細胞轉移和侵襲的能力，western blot分析四組細胞中Nanog的蛋白表達。應用免疫組織化學法檢測Nanog在卵巢癌組織中的蛋白表達情況。結果：卵巢癌細胞系Hey，Ho8910，SKOV3中Nanog的表達明顯高于永生化和良性卵巢上皮細胞系（P＜0.05）。FSH上調Nanog的

3、表達以濃度和時間依賴的方式。對于遷移和侵襲能力，對照組（Con+si-Con，Con+si-Nanog）明顯低于實驗組（FSH+si-Con，F(xiàn)SH+si-Nanog）（P＜0.05）。卵巢癌組織中的Nanog表達水平明顯高于正常卵巢組織（P＜0.05），Nanog蛋白表達與卵巢癌轉移相關。結論：Nanog是FSH重要的下游靶基因，介導FSH誘導的卵巢癌轉移作用。
　　第一部分Nanog在不同類型卵巢細胞株中的表達及調控
　

4、　目的：選取合適的卵巢癌細胞株作為實驗細胞株，檢測Nanog在不同類型卵巢癌細胞中的表達情況；研究卵泡刺激素（FSH）對Nanog表達的調控作用。
　　方法：（1）通過Western blotting技術檢測永生化上皮性卵巢細胞株Moody，良性卵巢腫瘤細胞株Mcv-152及上皮性卵巢癌細胞株Hey、Ho8910和SKOV3中Nanog的蛋白表達的情況。
　　（2）使用不同濃度（Con，5mIU/ml，25mIU/ml，50

5、mIU/ml，100mIU/ml）的卵泡刺激素（FSH）刺激上皮性卵巢癌細胞株SKOV3，使用Western blotting檢測Nanog蛋白的表達情況；使用50mIU/ml的FSH于不同時間（Con，3h，6h，12h，24h）刺激卵巢癌細胞株SKOV3，Western blotting檢測Nanog的蛋白的表達情況。
　　結果：
　?。?）Nanog在上皮性卵巢癌細胞株 Hey(1.659±0.09)，Ho8910(1

6、.659±0.075)和SKOV3(2.130±0.129)中的表達明顯高于永生化的正常卵巢上皮細胞株 Moody(0.678±0.06)和良性卵巢腫瘤細胞株 Mcv-152(1.371±0.073)。Hey、Ho8910和SKOV3細胞株的Nanog表達相對于Moody的Nanog表達差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.006，P=0.004,P=0.004）。SKOV3的Nanog表達相對于Mcv-152的Nanog表達差異具有統(tǒng)計學意義。

7、
　?。?）在一定濃度范圍內，F(xiàn)SH能顯著上調上皮性卵巢癌細胞SKOV3中Nanog的蛋白表達，而且以劑量依賴的方式，在FSH濃度為50mIU/ml上調作用最明顯。
　　（3）在一定時間范圍內（24h），F(xiàn)SH能顯著上調上皮性卵巢癌細胞SKOV3中Nanog的蛋白表達，作用方式呈時間依賴的方式。
　　結論：
　　（1）相對正常卵巢或者卵巢良性腫瘤細胞，Nanog在卵巢癌細胞中表達明顯上調。
　?。?）在一定

8、濃度和時間范圍內，F(xiàn)SH能夠顯著上調卵巢癌細胞 SKOV3中Nanog的蛋白表達水平。
　　第二部分Nanog介導FSH誘導卵巢癌細胞的遷移和侵襲
　　目的：探索Nanog在FSH誘導的卵巢癌細胞遷移和侵襲中的作用。
　　方法：以上皮性卵巢癌細胞SKOV3為研究對象，用RNA干擾技術敲除Nanog在SKOV3細胞中的表達，處理分為四組：Con+si-Con，F(xiàn)SH+si-Con，Con+si-Nanog和FSH+si-

9、Nanog，同時使用FSH刺激并設立對照。使用劃痕實驗(wound healing assay)檢測干擾Nanog后，檢測FSH對卵巢癌細胞SKOV3遷移能力的影響。使用Transwell侵襲實驗(Transwell invasion assay)檢測干擾Nanog后，檢測FSH對卵巢癌細胞SKOV3侵襲能力的影響。
　　結果：（1）FSH刺激明顯增加SKOV3細胞遷移能力（P＜0.05），使用si-Nanog干擾Nanog表達，

10、明顯減弱了FSH誘導的細胞遷移（P＜0.05）。Con+si-Nanog（0.815±0.028）組細胞遷移距離相對于Con+si-Con（0.670±0.021）組細胞遷移距離具有統(tǒng)計學意義（P=0.02）。FSH+si-Nanog（0.710±0.020）組細胞遷移距離相對于FSH+si-Con（0.355±0.025）組細胞遷移距離具有統(tǒng)計學意義（P=0.004）。
　　（2）FSH處理顯著增加卵巢癌SKOV3細胞的侵襲能力

11、（P＜0.05），干擾Nanog表達，明顯阻斷了FSH誘導的卵巢癌增加的侵襲能力（P＜0.05）。Con+si-Nanog（2.5±0.7）組細胞侵襲能力相對于Con+si-Con（9±1.5）組細胞侵襲能力具有統(tǒng)計學意義（P=0.028）。FSH+si-Nanog（10±1.6）組細胞侵襲能力相對于FSH+si-Con（25±1.3）組細胞侵襲能力具有統(tǒng)計學意義（P=0.008）。
　　結論：在上皮性卵巢癌細胞SKOV3中，Na

12、nog介導FSH誘導的上皮性卵巢癌細胞的遷移和侵襲。
　　第三部分Nanog在卵巢組織中表達與卵巢癌轉移的關系
　　目的：檢測Nanog在正常卵巢組織和卵巢癌組織中的表達，并分析其在卵巢癌組織中的表達與相關臨床病理資料的關系。
　　方法：應用免疫組織化學的方法檢測5例正常卵巢組織和60例卵巢癌組織中Nanog的表達情況，比較兩種組織中Nanog表達的差異，并通過統(tǒng)計學方法分析其在卵巢癌組織中的表達與相關臨床病理資料的關