MiR-20b在肝癌中表達(dá)的意義及調(diào)控HIF-1α、VEGF對(duì)肝癌細(xì)胞(HepG2)增殖及凋亡的影響.pdf

1、薛同敏MiRNA一20b在肝癌中表達(dá)的意義及對(duì)肝癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響MiR20b在肝癌中表達(dá)的意義及調(diào)控HIF1Q、VEGF對(duì)肝癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響中文摘要目的探究miR20b在肝癌中表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系。明確miR20b在HepG2細(xì)胞中的生物學(xué)功能，分析并驗(yàn)證其發(fā)揮作用的直接靶基因，探索其HepG2細(xì)胞增殖及凋亡的可能分子機(jī)制。方法1、收集76例肝癌組織標(biāo)本并且選擇76例正常肝臟組織作為對(duì)照，運(yùn)用RTPCR分別

2、檢測兩組miR20b的表達(dá)水平。2、根據(jù)miR20b在肝癌組織中的表達(dá)水平，將HCC患者分為miR一20b高表達(dá)組和低表達(dá)組，進(jìn)而分析miR20b表達(dá)量與HCC患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后之問的關(guān)系。3、利用生物學(xué)數(shù)據(jù)庫檢索miR20b可能的靶基因，并通過雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)、Westernblot等技術(shù)鑒定miR20b對(duì)其靶基因的調(diào)控。4、通過體外轉(zhuǎn)染miR20bmimic和inhibitor及siRNAHIF1a、siRNAVEGF的方法，

3、以MTT、流式細(xì)胞凋亡等檢測miR20b對(duì)HepG2細(xì)胞增殖與凋亡的影響。結(jié)果1、分別檢測了76例肝癌組織及正常肝臟組織中miR20b的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在大部分肝癌組織中miR20b表達(dá)水平明顯增高，差異有顯著性。2、MiR20b表達(dá)水平與年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分級(jí)無關(guān)，但與腫瘤轉(zhuǎn)移(P=O00)、TNM分期(P=Ooo)及腫瘤復(fù)發(fā)(P=O023)密切相關(guān)，miR20b的高表達(dá)與肝癌患者的短總體生存期相關(guān)，提示miR20b可以作為一個(gè)

4、判斷肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因子。3、構(gòu)建HIF1a、VEGF37UTRpGL3cm野生型及突變型熒光素酶報(bào)告載體和pCDH—miR一20b質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后。結(jié)果顯示，miR20bb可以顯著下調(diào)含有HIF—la、VEGF靶基因37一UTR的熒光素酶報(bào)告基因pGL3—37UTR的活性，而對(duì)含突變位點(diǎn)的表達(dá)質(zhì)粒對(duì)熒光素酶活性無明顯改變。表明miR一20b對(duì)HIF10t、VEGF37UTR有直接負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。4、MiR一20b與HI

5、F一10【、VEGF在HepG2細(xì)胞正?；蚰M低氧條件表達(dá)水平呈現(xiàn)相反趨勢(shì)。在常氧條件下，miR20b的表達(dá)與低氧組(低氧組細(xì)胞使用3009mol／LCoCl2處理細(xì)胞24h)相比明顯增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。低氧條件下VEGF的mRNA表達(dá)水平與常氧組相比明ClinicopathologicalsignificanceofmicroRNA20bexpressioninhepatocellularcarcinomaandregulation

6、ofHIFlaandVEGFeffectoncellproliferationandapoptosisABSTRACTObjective：TheaimedofthisstudytoinvestigatedtheexpressionlevelsofmiR20brelationshipwithclinicopathologicalparametersandprognosisinhepatocellularcarcinomaAnalyzean

7、dverifybiologicalfunctionofmiR20binHepG2cells，theirdirecttargetgenesandtoexploreitspossiblemolecularmechanismsofproliferationandapoptosisMethods：1Atotalof76casesofHCCstissueswereobtainedfrompatientscollectand76normallive

8、rtissues，usedascontrolsanduseRTqPCRdetectedtheexpressionlevelsofmiR一20bofthetwogroups2AccordingtotheexpressionlevelofmiR一20binHCCThepatientsweredividedintothehighexpressionofmiR一20bgroupandlowexpressiongroup，andthenanaly

9、zetherelationshipbetweentheexpressionofmiR20bandHCCclinicopathologicalparametersandprognosis3UseofbiologicaldatabasestoretrievemiR20btargetgenesanddouble—luciferasereportersystemandWesternblotappraisalofmiR20bregulationo

10、fitstargetgenes4BytransfectionofmiR一20bmimicinhibitorsiRNAHIF1aandsiRNAVEGFapproachtoMTTflowcytometrytodetectmiR一20beffectoncellsproliferationandapoptosisofHepG2cellsResults：1FromtheqRTPCRresultfoundthatmiR20bexpressionl

11、evelsweresignificantlyupregulatedinHCCcancertissuesthanthoseinthenoll：11a1contr012TheexpressionlevelsofmiR一20binHCCpatientswerenosig—nificantcorrelationwithgenderage，tumorsize，AFP(ng／m1)andTumorgradeButwhenwecomparingmiR