長鏈非編碼RNA SNHG5對食管癌細胞生物學(xué)特性的影響及其抑制食管癌細胞EMT的機制研究.pdf

1、目的:研究長鏈非編碼RNA SNHG5對食管癌細胞增殖、遷移和侵襲能力的影響，并探討SNHG5抑制食管癌細胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)變的可能機制。
　　方法:
　　1、應(yīng)用qPCR法檢測食管癌組織、癌旁組織、非癌組織和食管癌細胞中SNHG5和MTA2的表達，并分析SNHG5與MTA2二者表達水平的相關(guān)性，同時分析SNHG5的表達水平與食管癌患者臨床病理特征的相關(guān)性。
　　2、應(yīng)用MTS法、Transwell遷移和Matrigel侵

2、襲實驗檢測過表達/敲低SNHG5對食管癌細胞增殖活性、遷移能力和侵襲能力的影響。
　　3、應(yīng)用qPCR法檢測食管癌細胞經(jīng)不同放射劑量照射后SNHG5和MTA2表達水平的變化。
　　4、應(yīng)用qPCR法檢測食管癌細胞經(jīng)放線菌酮處理后過表達SNHG5對MTA2表達水平的影響。
　　5、應(yīng)用RNA-pulldown實驗及Western blotting實驗檢測SNHG5能否與MTA2蛋白結(jié)合。
　　6、應(yīng)用細胞免疫熒光法

3、檢測過表達SNHG5食管癌細胞的形態(tài)學(xué)改變。
　　7、應(yīng)用qPCR法檢測過表達/敲低SNHG5對MTA2及EMT相關(guān)基因表達水平的影響。
　　8、應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法檢測過表達SNHG5對MTA2及EMT相關(guān)蛋白表達水平的影響。
　　9、應(yīng)用Transwell遷移、Matrigel侵襲、qPCR及Western blotting實驗檢測過表達SNHG5同時過表達MTA2對食管癌細胞遷移和侵襲能力的影響以及EMT相關(guān)基因和蛋

4、白表達水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1、qPCR實驗結(jié)果顯示，與食管非癌組織相比，食管癌組織中SNHG5的表達水平下調(diào)(P＜0.01)、MTA2的表達水平上調(diào)(P＜0.05);與正常食管上皮細胞相比，食管癌細胞中SNHG5的表達水平下調(diào)（P＜0.05）、MTA2的表達水平上調(diào)（P＜0.05），且食管癌組織和細胞中SNHG5與MTA2表達水平均呈明顯負相關(guān)關(guān)系（r=-0.47，P＜0.001;r=-0.74，P＜0.05）;食

5、管癌組織中SNHG5與U50的表達水平呈明顯正相關(guān)關(guān)系（r=0.62，P＜0.001）。食管癌組織中SNHG5的表達水平與患者的年齡、臨床分期、組織學(xué)分級和腫瘤大小無關(guān)(P＞0.05)，而與腫瘤的淋巴結(jié)浸潤和遠端轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05)。
　　2、MTS法檢測結(jié)果顯示，過表達SNHG5對食管癌KYSE-30和KYSE-510細胞增殖活性無明顯影響（P＞0.05）。
　　3、Transwell遷移結(jié)果顯示，過表達SNHG5能夠

6、抑制食管癌KYSE-30和KYSE-510細胞遷移能力（P＜0.05）;敲低SNHG5能夠促進KYSE-30和KYSE-510細胞的遷移能力（P＜0.05）。Matrigel侵襲實驗結(jié)果顯示，過表達SNHG5能夠抑制食管癌KYSE-30細胞侵襲能力（P＜0.05）;敲低SNHG5能夠促進KYSE-30細胞侵襲能力（P＜0.05）。
　　4、qPCR實驗結(jié)果顯示，與空白對照組相比，1Gy、5Gy處理組KYSE-30細胞中SNHG5的

7、表達水平上調(diào)（P＜0.05），MTA2的表達水平下調(diào)(P＜0.05)。
　　5、RNA-pulldown聯(lián)合Western blotting實驗結(jié)果顯示，SNHG5在食管癌細胞中能夠與MTA2蛋白相結(jié)合。
　　6、細胞免疫熒光法結(jié)果顯示，過表達SNHG5能夠誘導(dǎo)食管癌KYSE-30細胞形態(tài)發(fā)生上皮樣改變。
　　7、qPCR實驗和Western blotting實驗結(jié)果顯示，過表達SNHG5能夠降低MTA2、N-cad、

8、Vimentin、CD24、MYLK和IGF2BP1基因和蛋白表達（P＜0.05），促進上皮標志物E-cad基因和蛋白表達;敲低SNHG5能夠促進MTA2、N-cad、Vimentin、CD24、MYLK和IGF2BP1基因表達，抑制E-cad基因表達（P＜0.05）。
　　8、qPCR實驗結(jié)果顯示，食管癌細胞經(jīng)放線菌酮處理后，CD511B轉(zhuǎn)染組與SNHG5轉(zhuǎn)染組中MTA2的降解程度無明顯差異（P＞0.05）。
　　9、與S

9、NHG5單獨轉(zhuǎn)染組相比，過表達MTA2可逆轉(zhuǎn)SNHG5對細胞功能遷移和侵襲能力的影響，并引起食管癌細胞E-cad的表達水平下調(diào)，N-cad、Vimentin等表達水平上調(diào)，且細胞的遷移和侵襲能力顯著增加（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　SNHG5在食管癌組織和細胞中表達下調(diào)，MTA2在食管癌組織和細胞中表達上調(diào)，且兩者表達水平呈負相關(guān)關(guān)系。SNHG5對食管癌細胞增殖活性無明顯影響，但能夠抑制細胞的遷移、侵襲，并抑制食管癌細