玉米與大斑病菌構(gòu)成的不同互作中基因表達(dá)的研究.pdf

1、玉米大斑病是由玉米大斑病菌引起的玉米葉部主要病害，培育和種植玉米抗病品種是防治玉米大斑病最經(jīng)濟(jì)、有效的途徑。因此，分離、克隆玉米抗大斑病相關(guān)基因，明確其編碼蛋白的身份和功能，對(duì)于揭示玉米抗大斑病的分子機(jī)制和抗病基因工程育種具有重要意義。 本試驗(yàn)以玉米自交系B37Htl與玉米大斑病菌0號(hào)小種和1號(hào)小種構(gòu)成的非親和性組合和親和性組合為試驗(yàn)材料，利用mRNA差異顯示技術(shù)(DDRT-PCR)對(duì)玉米葉片的基因表達(dá)情況進(jìn)行分析，回收非親和性

2、互作中特異表達(dá)的基因片段，對(duì)其進(jìn)行克隆、測(cè)序及同源性分析。 試驗(yàn)獲得以下主要結(jié)果：①采用PCR擴(kuò)增和聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，對(duì)26個(gè)隨機(jī)引物進(jìn)行篩選。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，6個(gè)引物適合一步擴(kuò)增法，退火溫度在40～47℃之間；9個(gè)引物適合兩步擴(kuò)增法，退火溫度(第二步擴(kuò)增)在46～51℃之間。 ②利用篩選出的隨機(jī)引物對(duì)cDNA樣品進(jìn)行DDRT-PCR擴(kuò)增，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染檢測(cè)，共獲得差異表達(dá)基因片段107條。這些片段可以分為三

3、類：A.親和性互作及對(duì)照中沒(méi)有，非親和性互作中特有的片段26條，占24﹪；B.與親和性互作及對(duì)照相比，非親和性互作中表達(dá)量增加的片段39條，占36﹪；C.與親和性互作及對(duì)照相比，非親和性互作中表達(dá)量降低的片段42條，占40﹪。對(duì)它們進(jìn)行回收和二次擴(kuò)增，經(jīng)1.2﹪瓊脂糖電泳檢測(cè)，其中98個(gè)回收產(chǎn)物能產(chǎn)生擴(kuò)增條帶，差異條帶的回收率為92﹪。 ③經(jīng)反式Northern雜交檢測(cè)，最終獲得陽(yáng)性片段46條，陽(yáng)性率為46.9﹪，其中A類片段1