PI3K-mTOR雙重抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)血管瘤細(xì)胞的影響及機(jī)制.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩40頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  觀察PI3K/ mTOR雙重抑制劑NVP-BEZ235對(duì)體外培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖、凋亡及PI3K/AKt/mTOR信號(hào)通路中關(guān)鍵分子的影響,探討PI3K/mTOR雙重抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的作用及機(jī)制。
  方法:
  1.選取手術(shù)切除的嬰幼兒血管瘤標(biāo)本,組織塊結(jié)合酶消化法培養(yǎng)原代血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞,在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn),繪制生長(zhǎng)曲線。細(xì)胞傳至第四代后,采用第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原進(jìn)行鑒定。

2、
  3.無(wú)血清培養(yǎng)基處理血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞24h后,干預(yù)組加入0.50μM、1.00μM NVP-BEZ235,空白對(duì)照組加入完全培養(yǎng)基,共同孵育24h。通過(guò)CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期,免疫蛋白質(zhì)印跡方法檢測(cè) PI3K、p-Akt、mTOR及p70s6k蛋白的表達(dá)水平,分析血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖及凋亡變化與四種蛋白表達(dá)水平的相互關(guān)系。
  結(jié)果:
  1.血管瘤原代培養(yǎng)1周后出現(xiàn)少量貼壁細(xì)

3、胞,3周后細(xì)胞由組織塊向周圍成同心圓式分布并且生長(zhǎng)速度加快,4周后細(xì)胞基本鋪滿培養(yǎng)瓶底,顯微鏡下觀察可看到梭形或稍不規(guī)則形態(tài)的細(xì)胞,成鋪路石樣排列。第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原鑒呈陽(yáng)性表達(dá)。
  2. NVP-BEZ235干預(yù)24h后,CCK-8細(xì)胞增殖檢測(cè)顯示,0.50μM、1.00μM NVP-BEZ235組的OD值分別為(0.88±0.03、0.59±0.05),與對(duì)照組(1.10±0.02)比較,差異均有顯著性(P<0.01,t=

4、7.05、13.07);且1.00μM組比0.50μM組對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用更強(qiáng),差異具有顯著性(P<0.01,t=9.23)。
  3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示,0.50μM組G0/G1期細(xì)胞比例為(60.62±0.71)%,1.00μM組G0/G1期細(xì)胞比例為(65.99±2.55)%,均較對(duì)照組(53.71±1.43)%高,差異均有顯著性(P<0.01,t=-7.51、-7.28);且1.00μM組較0.50μM組更高,差異有有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義(P<0.05,t=-3.51)。
  4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示,0.50μM組內(nèi)皮細(xì)胞總凋亡率為(9.20±0.75)%,1.00μM組內(nèi)皮細(xì)胞總凋亡率為(13.13±1.72)%,均較對(duì)照組(2.77±1.23)%升高,差異均有顯著性(P<0.01,t=-9.80、-8.93);且1.00μM組較0.50μM組更高,差異有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,t=-3.62)。
  5.蛋白免疫印跡檢測(cè)顯示,0.50μM N

6、VP-BEZ235組 PI3K(0.16±0.03)、p-Akt(0.13±0.01)、mTOR(0.12±0.02)蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組PI3K(0.25±0.01)、p-Akt(0.17±0.01)、mTOR(0.19±0.00)下降,p70s6k(0.18±0.01)蛋白較對(duì)照組(0.10±0.02)升高,差異具有顯著性(P<0.01,t=4.71、8.51、6.62、-6.26);1.00μM NVP-BEZ23組PI3K(0.

7、10±0.01)、p-Akt(0.10±0.01)、mTOR(0.05±0.00)蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組下降,p70s6k(0.31±0.02)蛋白較對(duì)照組升高,差異具有顯著性(P<0.01,t=26.68、15.40、38.84、-14.77);且1.00μM NVP-BEZ235組較0.50μM NVP-BEZ235組,PI3K、p-Akt、mTOR蛋白水平下降更為明顯,p70s6k蛋白蛋白水平上升更為明顯,差異具有顯著性(P0.01

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論