sCTLA-4聯(lián)合sFasL誘導(dǎo)小鼠皮膚移植免疫耐受及CTLA-4-FasL膜鑲嵌表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、CTLA-4是表達(dá)于活化T細(xì)胞表面的共刺激信號(hào)抑制配體，與抗原遞呈過(guò)程中T細(xì)胞活化的負(fù)調(diào)控有關(guān)；FasL屬于腫瘤壞死因子家族，能傳導(dǎo)細(xì)胞凋亡信號(hào)，誘導(dǎo)活化的T細(xì)胞凋亡；白介素-10(IL-10)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)都是體內(nèi)具有免疫抑制功能的分子。 第一部分探討了sCTLA-4聯(lián)合sFasL、IL-10、TGF-B誘導(dǎo)小鼠皮膚移植免疫耐受的作用及機(jī)制。以C57BI．／6小鼠為供體，BALB／c小鼠為受體進(jìn)行皮膚移植，分

2、7個(gè)組。移植完后進(jìn)行肌肉注射給藥并觀察皮膚的存活狀況：用ELISA試劑盒檢測(cè)各組小鼠血清中IL-2、IL-4和FN-T的含量；取實(shí)驗(yàn)鼠、相應(yīng)供體鼠及實(shí)驗(yàn)不相關(guān)ICR鼠的脾臟淋巴細(xì)胞，進(jìn)行雙向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，以MTr法測(cè)刺激指數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：NS組皮膚平均存活時(shí)間為6．9d，而ITCF組皮膚平均存活時(shí)間最長(zhǎng)，達(dá)22．5d：C組的皮膚平均存活時(shí)間為19．2d，和CsA組(15．7d)相比能差異顯著性延長(zhǎng)皮膚存活時(shí)間；CF組的皮膚平均存活時(shí)

3、間比C和F組分別延長(zhǎng)2．5d和5．7d；ITCF組與CF組相比存活時(shí)間無(wú)顯著異性，但與IT組相比具有差異極顯著性；各給藥組與對(duì)照組相比血清中IL-2和IFN-y含量顯著降低，IL-4含量顯著升高。以上結(jié)果可以顯示本實(shí)驗(yàn)室基因工程表達(dá)的sFasL和sCTLA-4在體內(nèi)具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)免疫耐受的生物活性：sCTLA-4、sFasL單用或兩者聯(lián)用都能延長(zhǎng)移植皮膚的存活時(shí)間，并且聯(lián)用具有協(xié)同效應(yīng)；單獨(dú)使用以sCTLA-4效果最佳，并且優(yōu)于臨床上常

4、用免疫抑制藥物CsA；在sCTLA-4、sFasL聯(lián)用的基礎(chǔ)上應(yīng)用IL-10、TGF-B，疊加效應(yīng)不明顯；sCTLA-4和sFasL誘導(dǎo)的皮膚移植免疫耐受具有抗原特異性；血清中細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ含量與移植物存活時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，而IL-4呈正相關(guān)；本研究工作為尋找免疫耐受誘導(dǎo)途徑、指導(dǎo)臨床用藥以及預(yù)測(cè)受體耐受狀況和移植物存活時(shí)間提供一定實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 第二部分內(nèi)容是將CTLA-4和FasL的胞外區(qū)及跨膜區(qū)序列體外拼接在

5、一起并克隆到腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV形成pAdTrack-CMV-CF質(zhì)粒，同時(shí)構(gòu)建了另外3個(gè)質(zhì)粒：?jiǎn)为?dú)含有FasL胞外區(qū)及跨膜區(qū)的質(zhì)粒pAdTrack-CMV-F；同時(shí)干擾B71、B7．2的siRNA干擾質(zhì)粒pAdTrack-CMV-U6B7si；同時(shí)表達(dá)CTLA-4和FasL及干擾B7．1、B7．2的質(zhì)粒pAdTrack-CMV-CFU687si。將以上4個(gè)質(zhì)粒分別與腺病毒骨架載體pAdeasy-1在BJ5183菌株里