ABCB6參與黑素代謝的機制初探.pdf

1、目的:ABCB6是本課題組率先確認(rèn)的一個新的黑素代謝調(diào)控因子。本研究擬從mRNA水平和蛋白質(zhì)水平初步探討ABCB6參與黑素代謝的可能機制。
　　方法:采用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建野生型 ABCB6表達(dá)質(zhì)粒 pDsRed-wt-ABCB6和突變型ABCB6表達(dá)質(zhì)粒pDsRed-L356P-ABCB6。通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將表達(dá)空載質(zhì)粒、pDsRed-wt-ABCB6質(zhì)粒和pDsRed-L356P-ABCB6質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染人黑素瘤細(xì)胞A375，

2、再應(yīng)用Real-time PCR分別檢測這些細(xì)胞TYR、TYRP1、MC1R、ISPmRNA表達(dá)水平和Western blot分別檢測TYR、TYRP1、MC1R、ISP蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1)本實驗成功構(gòu)建了pDsRed-wt-ABCB6質(zhì)粒和pDsRed-L356P-ABCB6質(zhì)粒；(2)轉(zhuǎn)染32h的pDsRed-wt-ABCB6質(zhì)粒組和pDsRed-L356P-ABCB6質(zhì)粒組A375細(xì)胞TYR、TYRP1、MC1R

3、和ISP mRNA表達(dá)水平與pDsRed-N1空載質(zhì)粒組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；(3)轉(zhuǎn)染24h的 pDsRed-wt-ABCB6質(zhì)粒組和pDsRed-L356P-ABCB6質(zhì)粒組A375細(xì)胞TYR、TYRP1、MC1R、ISP的蛋白表達(dá)水平與 pDsRed-N1空載質(zhì)粒組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；轉(zhuǎn)染32h、40h的pDsRed-L356P- ABCB6質(zhì)粒組 A375細(xì)胞 TYRP1蛋白表達(dá)水平明顯低于pDsRed-N1空載質(zhì)粒組（P<0

4、.05），而pDsRed-wt-ABCB6質(zhì)粒組A375細(xì)胞TYRP1蛋白表達(dá)水平較pDsRed-N1空載質(zhì)粒組變化不明顯；轉(zhuǎn)染32h、40h，pDsRed-wt-ABCB6質(zhì)粒組和 pDsRed-L356P-ABCB6質(zhì)粒組 A375細(xì)胞 TYR、MC1R、ISP蛋白表達(dá)水平較pDsRed-N1空載質(zhì)粒組無明顯變化。
　　結(jié)論:（1）突變型ABCB6對TYR、TYRP1、MC1R和ISP mRNA表達(dá)水平影響不明顯；（2）ABC