筋骨痹痛湯藥物血清對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的兔軟骨細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、目的：深入研究骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制，研究中藥組方筋骨痹痛湯（獨(dú)活寄生湯加骨碎補(bǔ)、續(xù)斷、淫羊霍）含藥血清對(duì)軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖、分化過(guò)程的影響。探討中醫(yī)藥治療骨關(guān)節(jié)炎的機(jī)理，以及軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)的分化規(guī)律，為中醫(yī)“腎主骨生髓，主生長(zhǎng)發(fā)育”提供實(shí)證，為人工調(diào)控骨骼形成、退化和骨組織修復(fù)提供理論基礎(chǔ)。觀察筋骨痹痛湯藥物血清對(duì)白細(xì)胞介素-1β（ IL-1β）誘導(dǎo)的兔軟骨細(xì)胞Bcl-2、Bax表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響，以及筋骨痹痛湯治療骨性關(guān)節(jié)炎的機(jī)制

2、。
　　方法：隨機(jī)取雄性成年新西蘭兔8只分成4組，分別灌服生理鹽水、補(bǔ)肝腎中藥（骨碎補(bǔ)、續(xù)斷和淫羊霍）、獨(dú)活寄生湯和筋骨痹痛湯，分別采血，并提取制得空白血清、補(bǔ)肝腎中藥血清、獨(dú)活寄生湯血清和筋骨痹痛湯藥物血清。分離制備幼兔軟骨細(xì)胞，采用甲苯胺藍(lán)染色和 II型膠原免疫熒光法鑒定軟骨細(xì)胞。取第三代軟骨細(xì)胞，隨機(jī)分五組實(shí)驗(yàn)：空白組（A組）、模型組（B組）、補(bǔ)肝腎中藥對(duì)照組（C組）、獨(dú)活寄生湯對(duì)照組（D組）、筋骨痹痛湯組（E組）。A組用含

3、10％空白血清的DMEM培養(yǎng)36h，其余各組均先采用含IL-1β的DMEM誘導(dǎo)培養(yǎng)12h，然后B、C、D、E組分別給予含10%空白血清、10%補(bǔ)肝腎中藥藥物血清、10%獨(dú)活寄生湯藥物血清、10%筋骨痹痛湯藥物血清的DMEM培養(yǎng)24h。反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR和免疫印跡法檢測(cè)兔軟骨細(xì)胞Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡比例。
　　結(jié)果：經(jīng)鑒定分離制備的細(xì)胞為軟骨細(xì)胞。軟骨細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后，C、D、E組Bcl

4、-2 mRNA和蛋白表達(dá)高于B組，D、E組高于C組，E組高于D組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Bax mRNA和蛋白表達(dá)，以及軟骨細(xì)胞凋亡率，C、D、E組低于B組，D、E組低于C組，E組低于D組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：補(bǔ)肝腎中藥血清、獨(dú)活寄生湯血清、筋骨痹痛湯藥物血清對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的兔軟骨細(xì)胞凋亡均具有保護(hù)作用，但是以筋骨痹痛湯藥物血清的作用最為顯著，其機(jī)制可能是通過(guò)促進(jìn)Bcl-2表達(dá)和抑制Ba