雙醋瑞因?qū)L-1β誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡的影響和作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討雙醋瑞因?qū)w外 IL-1β誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響以及可能作用機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、HE染色和Ⅱ型膠原免疫熒光染色鑒定軟骨細(xì)胞，rhIL-1β刺激軟骨細(xì)胞制備體外OA模型，實(shí)驗(yàn)分成正常對(duì)照組、模型組（10ng/ml rhIL-1β）和實(shí)驗(yàn)組（不同濃度雙醋瑞因+10ng/ml rhIL-1β），利用①M(fèi)TT法觀察軟骨細(xì)胞的增殖情況；②流式細(xì)胞術(shù)觀察軟骨細(xì)胞凋亡率；③

2、應(yīng)用Western Blotting和RT-PCR從蛋白質(zhì)和基因兩水平檢測(cè)p38MAPK的表達(dá)。以上實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次。
　　結(jié)果：①倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞貼壁后逐漸展開、變平、伸出短小的突出,外觀呈多角形、三角形，細(xì)胞胞質(zhì)豐富,胞核清楚,核為圓形或橢圓形,位于胞體中心，核仁為1-3個(gè)；HE染色軟骨細(xì)胞呈多角形,胞質(zhì)呈均質(zhì)狀染成紅色，胞核較大,圓形或橢圓形,位于中央,染成淡藍(lán)色；Ⅱ型膠原免疫熒光染色后胞漿被染成黃綠色,胞核染色不明顯。②

3、與正常對(duì)照組比較，雙醋瑞因能促進(jìn)軟骨細(xì)胞 MTT增殖活性（P<0.01）以濃度為10-5M更明顯，IL-1β作用后軟骨細(xì)胞增殖能力下降（P<0.05），但與正常對(duì)照組比較濃度為10-4M和10-5M仍能促進(jìn)軟骨細(xì)胞MTT增殖活性（P<0.05）。③正常對(duì)照組的軟骨細(xì)胞早期凋亡率為2-5％；IL-1β能夠顯著促進(jìn)軟骨細(xì)胞早期凋亡（18-24%）（P<0.01）；濃度為10-4M和10-5M的雙醋瑞因可降低IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞早期凋亡率

4、，凋亡率分別為11-13%（P<0.01）和15-17%（P<0.05），濃度為10-6M的雙醋瑞因?qū)浌羌?xì)胞早期凋亡率無(wú)影響（P>0.05）。④與正常對(duì)照組比較，IL-1β能夠顯著誘導(dǎo)p38的磷酸化（P<0.01），濃度為10-5M雙醋瑞因能夠顯著抑制IL-1β誘導(dǎo)p38磷酸化的表達(dá)（P<0.01）。⑤與正常對(duì)照組比較，模型組軟骨細(xì)胞中p38mRNA的表達(dá)量升高21.92（3.78）倍，加入濃度為10-5M雙醋瑞因后p38mRNA的表