HBV所致慢加急性肝衰竭患者外周血單個核細胞中微小RNAs表達譜的變化.pdf

1、研究背景:microRNAs(miRNAs)是一類大小約為22nt的小的非編碼RNA分子,在動物體內(nèi)大多數(shù)miRNA的生物合成過程是在RNA聚合酶II,核糖核酸內(nèi)切酶IIIDrosha及Dicer的作用下產(chǎn)生的。miRNA在生物界中廣泛存在。據(jù)推測動物體內(nèi)大約1％--5%基因編碼miRNA,正常細胞和腫瘤細胞都可以表達某種特定的miRNA。組織細胞內(nèi)外的miRNA表達圖譜是不一樣的,miRNA可選擇性地從組織細胞釋放到外周血中,這種選擇

2、性機制及外周血miRNA的穩(wěn)定性有利于miRNA成為疾病診斷的生物標志物。2008年Lawrie等在研究彌漫性大B細胞淋巴瘤病時,在病人血清中首先檢測出miR-21[1].Li等首次將血清中miRNA作為生物標志物,對HBV感染及HBV陽性的肝細胞癌(HCC)作出診斷。在他們研究中發(fā)現(xiàn)miR-375、miR-92a是HBV感染特有的,而miR-25、miR-375、let-7f可作為HBV陽性的肝細胞癌診斷的生物標志物,且miR-375

3、的特異性為96%,敏感度為100%[2]。陳[3]等人在研究中發(fā)現(xiàn),HBV攜帶者與重型肝炎患者PBMC中差異性表達的miRNA共有17個,其中hsa-miRNA-1246等5個表達上調(diào),hsa-miRNA-223,hsa-miRNA-547-3p,hsa-miRNA-150等12個miRNA表達下調(diào),對這些差異性表達的miRNA初步分析,發(fā)現(xiàn)其中2個參與機體免疫調(diào)節(jié),在12個低表達的miRNA中,miRNA-150和miRNA-223可

4、能與病毒性肝炎的肝細胞炎癥活動有關(guān)。其中miRNA-150主要參與調(diào)控B淋巴細胞的成熟,還通過調(diào)節(jié)Th1與Th2細胞的分化參與機體炎癥反應(yīng)[4]。
　　目的:本研究旨在探尋在HBV所致的慢加急性肝衰竭患者外周血單個核細胞中表達發(fā)生明顯改變的miRNAs,從中尋找與肝衰竭發(fā)生發(fā)展相關(guān)分子纖維蛋白原樣蛋白2/纖維介素(fibrinnogenlikeprotein2,fgl2),腫瘤壞死因子/腫瘤壞死因子受體(tumornecrosis

5、factorreceptor/tumornecrosisfactorreceptor,TNF/TNFR1),死亡受體CD95/死亡受體CD95配體(Fas/FasL),干擾素-γ(interferon-gamma,INF-γ)、干擾素-γ誘生蛋白-10(INF-γinducibleprotein-10,CXCL10)、Toll樣受體4(Toll-likereceptor4,TLR4)相互作用miRNAs,探求HBV所致的慢加急性肝衰竭疾

6、病的發(fā)生機制,從而為該疾病的診斷、治療、預(yù)防提供新思路。
　　方法:分別收集了20例HBV所致的慢加急性肝衰竭患者和慢乙肝輕度患者的外周血標本,收集外周血單個核細胞(PBMC),利用miRNAmicroarray芯片,分析兩組患者外周血單個核細胞(PBMC)中miRNAs表達譜系的變化,尋找表達水平顯著改變(上調(diào)或下調(diào)超過2倍)的miRNA。同時又借助生物信息學(xué)靶標預(yù)測軟件(TargetScan),找到與肝衰竭發(fā)生發(fā)展相關(guān)分子(h

7、fgl2,Fas/FasL、TNF/TNFR1、IFNγ、CXCL10、TLR4)相互作用miRNAs,對基因芯片的結(jié)果進行初篩。為了進一步驗證上述芯片結(jié)果的可靠性,我們采用了GeneCopoeia公司的All-in-One?miRNAqRT-PCRDetectionKit對初篩的4種microRNA分子表達情況進一步驗證,U48是一種在各種細胞中表達較為穩(wěn)定的RNA,在本實驗中作為內(nèi)參對照使用,所得的數(shù)據(jù)采用?ΔΔCT2方法進行計算,

8、并對所得的結(jié)果進行了統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:通過基因芯片并借助miRNA靶標預(yù)測軟件(TargetScan),分析發(fā)現(xiàn)在HBV所致的慢加急性肝衰竭患者外周血混合單個核細胞中明顯下調(diào)的microRNA有16個,其中,microRNA-181c、microRNA-30e、microRNA-1826、microRNA-107可能對肝衰竭發(fā)生發(fā)展相關(guān)的分子fgl2,Fas/FasL、TNF/TNFR1、IFNγ、CXCL10、TLR4起作