2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:GAS2(生長(zhǎng)抑制特異性蛋白2)調(diào)控細(xì)胞周期、凋亡和Calpain(鈣蛋白激酶)活性。GAS2-Calpain2軸在腫瘤細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中具有雙重作用,但關(guān)于GAS2-Calpain2軸在白血病細(xì)胞中的功能研究還非常有限,本研究旨在初步探討GAS2-Calpain2軸在白血病細(xì)胞生長(zhǎng)中的功能及作用機(jī)制。
  方法:
 ?。?)利用實(shí)時(shí)定量PCR(Quantitative Real-time PCR,Q-RT-PCR)和Ca

2、lpain活性檢測(cè)等方法檢測(cè)各類白血病患者骨髓細(xì)胞及白血病細(xì)胞株中 GAS2的mRNA表達(dá)及Calpain的活性;
 ?。?)Western blot和免疫熒光(Immunofluorescence,IF)技術(shù)檢測(cè)正常骨髓細(xì)胞、白血病患者骨髓細(xì)胞以及白血病細(xì)胞系中GAS2蛋白的表達(dá);
  (3)利用磷酸鈣沉淀法制備慢病毒,轉(zhuǎn)導(dǎo)THP-1和Jurkat細(xì)胞,Q-RT-PCR和Western blot等方法檢測(cè)干擾效率,比較GA

3、S2沉默和對(duì)照細(xì)胞的增殖、集落生成和Calpain活性的差異;
 ?。?)注射對(duì)照和GAS2沉默THP1至裸鼠皮下,比較它們生成腫瘤的能力;
 ?。?)免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)GAS2與Calpain2在THP-1和Jurkat細(xì)胞中的相互作用,并研究Calpain2敲減在GAS2沉默誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制中的作用;
 ?。?)比較GAS2沉默和對(duì)照慢性髓細(xì)胞白血?。–ML)患者CD34+細(xì)胞集落生成能力的差異。
  結(jié)果:<

4、br> ?。?)119例不同類型白血病患者骨髓中GAS2較正常骨髓都顯著異常高表達(dá);類似地,不同白血病細(xì)胞株中GAS2表達(dá)均較對(duì)照細(xì)胞顯著增高;Calpain活性在22例急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者樣本中較正常骨髓顯著降低;
 ?。?)免疫熒光染色顯示白血病細(xì)胞株CCRF-CEM、SHI-1、Jurkat、THP-1和K562中GAS2蛋白表達(dá)均明顯高于正常骨髓細(xì)胞;
 ?。?)使用慢病毒遞送含shNC(包含一段無(wú)義的對(duì)照

5、shRNA核苷酸序列)和sh919﹑sh1206(分別以shGAS2#1和shGAS2#2表示,分別包含特異性沉默GAS2的shRNA核苷酸序列)至THP-1和Jurkat細(xì)胞,GAS2的mRNA和蛋白表達(dá)抑制率均>60%;沉默GAS2顯著增強(qiáng)THP-1和Jurkat細(xì)胞的Calpain的活性并抑制細(xì)胞增殖和集落生成能力;
 ?。?)GAS2沉默顯著抑制THP-1細(xì)胞的裸鼠皮下成瘤能力;
  (5)通過(guò)免疫共沉淀證明了在Ju

6、rkat和 THP-1細(xì)胞中 GAS2特異性結(jié)合Calpain2而非Calpain1,在THP-1細(xì)胞中同時(shí)沉默GAS2和Calpain2能夠逆轉(zhuǎn)單獨(dú)沉默GAS2誘發(fā)的生長(zhǎng)抑制;
 ?。?)在CML干/祖細(xì)胞中沉默GAS2顯著抑制它們的集落生成能力。
  結(jié)論:GAS2在多種人類白血病包括慢性髓細(xì)胞白血?。–ML)、急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL)、急性髓細(xì)胞白血?。ˋML)均異常高表達(dá)。沉默GAS2在體內(nèi)和體外均能顯著抑制TH

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