金絲桃誘導(dǎo)型Bax懸浮細(xì)胞系的培養(yǎng)優(yōu)化及Bax基因信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)理的初步研究.pdf

1、Y 9 0 8 ' 7 5 7中圖分類號(hào)：Q 9 4 3 ．1 密級(jí)：公開⑩浙爐z 角幺乎碩士學(xué)位論文論文題目：全絲挑透曼型曼墼懸淫細(xì)胞丕的墻差優(yōu)化作者姓名： 盜曼應(yīng)學(xué)科專業(yè)： 盒墨登鱟提交日期：二o o 六年一月穩(wěn)定的懸浮細(xì)胞系，通過對(duì)培養(yǎng)溫度、p H 、轉(zhuǎn)速以及激素配比和濃度等因素的試驗(yàn)研究，確定了金絲桃轉(zhuǎn)B a x 基因懸浮細(xì)胞系的最適培養(yǎng)條件；發(fā)現(xiàn)B a x 基因的誘導(dǎo)表達(dá)可以促進(jìn)金絲桃細(xì)胞中次生代謝產(chǎn)物的合成；利用c

2、P T l 0 、D P I 等細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)專一性抑制劑初步探討了B a x 影響細(xì)胞中次生代謝產(chǎn)物合成的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)理。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1 轉(zhuǎn)B a x 基因的金絲桃懸浮細(xì)胞系構(gòu)建及細(xì)胞培養(yǎng)條件優(yōu)化。將固體培養(yǎng)的轉(zhuǎn)B a x 基因的金絲桃愈傷組織經(jīng)多次繼代培養(yǎng)后，篩選獲得了一種穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因懸浮細(xì)胞系。對(duì)培養(yǎng)基組成、p H 、溫度等培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，獲得了轉(zhuǎn)基因懸浮細(xì)胞系的最適培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基成分為M S + I ．5 ×1

3、0 ’5 M N A A + 1 0 一M B A 、2 5 。C 、p H 值5 ．7 、蔗糖含量3 ％、搖床轉(zhuǎn)速9 0 r p m 、接種量3 克。然后通過高產(chǎn)細(xì)胞系的篩選、定期的P C R 基因鑒定，我們選擇培養(yǎng)1 0 天左右的，P C R 結(jié)果為陽性的進(jìn)行傳種繼代，最終獲得了作為B a x 基因信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)理研究的可靠、理想的懸浮細(xì)胞系。2 B a x 基因促進(jìn)金絲桃細(xì)胞中次生代謝產(chǎn)物的合成。高效液相分析結(jié)果表明，B a x 基因