苯并咪唑類獸藥殘留LC-MS-MS方法及ELISA方法的建立.pdf

1、苯并咪唑類藥物(BZs)是一類廣譜、高效、低毒的驅(qū)蟲劑,已被廣泛用于獸醫(yī)生產(chǎn)中,如防治胃腸道線蟲、肺線蟲、肝吸蟲等；由于BZs在動物的安全評價試驗中表現(xiàn)出具有致畸和致突變性,因此目前使用的多數(shù)苯并咪唑類藥物被列為動物性食品獸藥殘留監(jiān)控的重要監(jiān)控對象。為了監(jiān)測畜產(chǎn)品中苯并咪唑類獸藥殘留,保證動物性食品安全,增強我國動物性食品在國際市場上的競爭力,必須建立一種快速準確的、用于篩選大批量的動物組織樣品的快速檢測方法,同時建立一種精密度高、特異

2、性強、穩(wěn)定性好的LC—MS／MS作為確認方法。
　　 本文利用LC—MS／MS建立一種檢測動物組織中包括前體藥物、代謝物在內(nèi)的12種苯并咪唑類獸藥的多殘留檢測方法。對豬肉、豬肝、羊肉、魚肉組織樣品,采用堿性乙酸乙酯作為提取液,經(jīng)濃縮后加入乙腈復溶、正己烷除脂；而對于牛奶樣品采用以正交試驗優(yōu)化的QuEChERS方法處理樣品,以含0.5％乙酸的乙腈溶液為提取溶劑,PSA為吸附劑。外標法定量,實驗結(jié)果表明各種基質(zhì)中該方法在1-200μ

3、g／L濃度范圍內(nèi)線性良好,回收率在70％-110％,RSD小于14％。而在加入內(nèi)標物質(zhì)13C6-噻苯達唑建立的內(nèi)標方法中,實驗結(jié)果表明五種基質(zhì)中在1.200μg／L的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)達到0.995以上,在5(牛奶中3μg／L)、50、100、200μg／kg四個添加水平下,平均回收率在71.4％-108.1％之間,相對標準偏差小于9.63％,檢測限低于1ppb,定量限低于2.5ppb,方法的準確度和精密度均符合殘留分析的要求

4、。
　　 通過分析苯并咪唑類化合物的結(jié)構(gòu),最終確定通過水解的方法改造BZs側(cè)鏈的氨基甲酸酯結(jié)構(gòu),然后對HRP進行偶聯(lián),通過紫外圖譜進行確定,實驗結(jié)果初步表明偶聯(lián)成功,然后將合成的酶標抗原商品化抗體建立直接競爭ELISA方法,通過方陣法確定包被抗體與酶標抗原的工作濃度,并對包被溫度和時間,封閉溫度和時間進行了優(yōu)化,然后建立ABZ抗體的標準曲線,結(jié)果表明在1-500μg／L范圍內(nèi)呈線性相關(guān),線性方程為y=-29.949x+84.23