苯并咪唑類(lèi)獸藥殘留LC-MS-MS方法及ELISA方法的建立.pdf

1、苯并咪唑類(lèi)藥物(BZs)是一類(lèi)廣譜、高效、低毒的驅(qū)蟲(chóng)劑,已被廣泛用于獸醫(yī)生產(chǎn)中,如防治胃腸道線蟲(chóng)、肺線蟲(chóng)、肝吸蟲(chóng)等；由于BZs在動(dòng)物的安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)中表現(xiàn)出具有致畸和致突變性,因此目前使用的多數(shù)苯并咪唑類(lèi)藥物被列為動(dòng)物性食品獸藥殘留監(jiān)控的重要監(jiān)控對(duì)象。為了監(jiān)測(cè)畜產(chǎn)品中苯并咪唑類(lèi)獸藥殘留,保證動(dòng)物性食品安全,增強(qiáng)我國(guó)動(dòng)物性食品在國(guó)際市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)力,必須建立一種快速準(zhǔn)確的、用于篩選大批量的動(dòng)物組織樣品的快速檢測(cè)方法,同時(shí)建立一種精密度高、特異

2、性強(qiáng)、穩(wěn)定性好的LC—MS／MS作為確認(rèn)方法。
　　 本文利用LC—MS／MS建立一種檢測(cè)動(dòng)物組織中包括前體藥物、代謝物在內(nèi)的12種苯并咪唑類(lèi)獸藥的多殘留檢測(cè)方法。對(duì)豬肉、豬肝、羊肉、魚(yú)肉組織樣品,采用堿性乙酸乙酯作為提取液,經(jīng)濃縮后加入乙腈復(fù)溶、正己烷除脂；而對(duì)于牛奶樣品采用以正交試驗(yàn)優(yōu)化的QuEChERS方法處理樣品,以含0.5％乙酸的乙腈溶液為提取溶劑,PSA為吸附劑。外標(biāo)法定量,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明各種基質(zhì)中該方法在1-200μ

3、g／L濃度范圍內(nèi)線性良好,回收率在70％-110％,RSD小于14％。而在加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)13C6-噻苯達(dá)唑建立的內(nèi)標(biāo)方法中,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明五種基質(zhì)中在1.200μg／L的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.995以上,在5(牛奶中3μg／L)、50、100、200μg／kg四個(gè)添加水平下,平均回收率在71.4％-108.1％之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于9.63％,檢測(cè)限低于1ppb,定量限低于2.5ppb,方法的準(zhǔn)確度和精密度均符合殘留分析的要求

4、。
　　 通過(guò)分析苯并咪唑類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu),最終確定通過(guò)水解的方法改造BZs側(cè)鏈的氨基甲酸酯結(jié)構(gòu),然后對(duì)HRP進(jìn)行偶聯(lián),通過(guò)紫外圖譜進(jìn)行確定,實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步表明偶聯(lián)成功,然后將合成的酶標(biāo)抗原商品化抗體建立直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,通過(guò)方陣法確定包被抗體與酶標(biāo)抗原的工作濃度,并對(duì)包被溫度和時(shí)間,封閉溫度和時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化,然后建立ABZ抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果表明在1-500μg／L范圍內(nèi)呈線性相關(guān),線性方程為y=-29.949x+84.23