FTY720與人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞協(xié)同治療內(nèi)毒素所致小鼠急性肺損傷的實驗研究.pdf

1、目的:急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合征(acute lung injury/acute respiratory distress syndrome, ALI/ARDS)是臨床危重癥患者高發(fā)病率和死亡率的主要原因，因缺乏有效的治療藥物，所以亟待尋找新的治療手段。近年研究發(fā)現(xiàn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human Umbilical Cord-Mesenchymal Stem Cells, hUC-MSCs)可以有效緩解急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合征

2、，而1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)對增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能具有重要作用，可抵抗肺臟的炎癥反應(yīng)，減輕肺損傷。FTY720為其類似物，是修飾后化學(xué)合成物，也是S1P1激動劑，具有免疫抑制作用，有研究結(jié)果表明，小劑量的S1P1激動劑對于小鼠急性肺損傷有保護(hù)作用。因此我們根據(jù)其各自功能及特點，推測hUC-MSCs與FTY720之間在治療ALI/ARDS中有協(xié)同性。本實驗研究的目的是探討hUC-MSCs

3、與FTY720治療內(nèi)毒素所致急性肺損傷的協(xié)同作用，以期增加治療效果，并減少各自的治療缺憾，同時對其治療機(jī)理進(jìn)行初步研究。
　　方法:將8-10周齡雌性 C57BL/6小鼠隨機(jī)分為5組，分別是正常組、LPS組、hUC-MSCs組、FTY720組、hUC-MSCs與FTY720聯(lián)合給藥組。正常組給予氣管內(nèi)滴注NS，其余各組滴注10 mg/kg內(nèi)毒素制備小鼠急性肺損傷模型，模型建立后24 h，分別給 hUC-MSCs組每只小鼠尾靜脈注射

4、2×105人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，給FTY720組每只小鼠腹腔內(nèi)注射劑量為0.1 mg/kg的 FTY720，聯(lián)合給藥組給予尾靜脈注射2×105人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和腹腔內(nèi)注射劑量為0.1 mg/kg的 FTY720。分別于造模后48 h及7 d處死小鼠，觀察各組肺組織病理變化（HE染色）和病理損傷評分、肺組織濕干重比值、肺 Micro-CT(活體)、BALF總蛋白和炎癥因子（IL-12p70、IL-10、 IL-6、MCP-1、IFN-γ、

5、TNF-α）含量在給藥后48小時和7天分別測得，48小時后分析各組小鼠生存率。提取肺總蛋白，進(jìn)行雙向電泳測定，對獲取的蛋白圖譜進(jìn)行分析，尋找差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，以觀察用內(nèi)毒素?fù)p傷后肺部蛋白質(zhì)表達(dá)的差異。
　　結(jié)果:1.小鼠肺組織損傷評分和肺CT結(jié)果表明我們成功建立了內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型。2.研究發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs組、FTY720組、hUC-MSCs與FTY720聯(lián)合給藥組的小鼠給藥后生存率都有所提高、肺病理損傷評分降低、

6、濕干重比值降低、灌洗液中總蛋白含量減少以及灌洗液中炎癥因子 IL-6、TNF-α、MCP-1減少。聯(lián)合給藥組與單獨使用hUC-MSCs或FTY720組相比，聯(lián)合給藥的治療效果最好,但其中生存率和肺濕干重比值的降低并沒有統(tǒng)計學(xué)意義。3.蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)果表明急性肺損傷小鼠的肺內(nèi)蛋白量是超過正常小鼠的。蛋白質(zhì)點數(shù)為(100±2)，其中有21個表達(dá)的蛋白差異點，通過蛋白質(zhì)譜鑒定和生物信息檢索結(jié)果顯示蛋白質(zhì)過氧化物酶-6在損傷肺和正常肺中有明顯

7、差異。
　　結(jié)論:氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素建立急性肺損傷小鼠模型較穩(wěn)定；使用 hUC-MSCs或FTY720的單獨給藥組可以減少肺內(nèi)炎癥，hUC-MSCs和 FTY720聯(lián)合給藥組與單獨給藥相比也可以通過彼此之間的相互作用有效緩解急性肺損傷；蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)果表明急性肺損傷小鼠肺組織中蛋白質(zhì)過氧化物酶-6表達(dá)的增加，機(jī)制還待進(jìn)一步研究。hUC-MSCs和 FTY720聯(lián)合給藥與分別單獨給藥相比也許是更優(yōu)的治療策略，其機(jī)制還有待于進(jìn)一步探究