大黃酸、大黃素誘導(dǎo)高糖狀態(tài)下腎小球系膜細(xì)胞凋亡的比較性研究.pdf

1、目的：探討大黃酸、大黃素對高糖狀態(tài)下SD大鼠腎小球系膜細(xì)胞(Glomerularmesangial cell，GMC)凋亡的影響。
　　方法：在高糖狀態(tài)下建立腎小球系膜細(xì)胞增殖病理模型，MTT法檢驗(yàn)；用不同濃度的大黃酸(20，40，80μmol·L-1)、大黃素(20，40，80μmol·L-1)分別刺激高糖狀態(tài)下GMC；HE染色(hematoxylin-eosin staining)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；DAPI(4’，6-Dia

2、midino-2-phenylindole，dihydrochloride)熒光染色觀察細(xì)胞核凋亡情況；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果：1、系膜細(xì)胞增殖模型的研制
　　25mmol/L的葡萄糖刺激24小時(shí)即顯著地促進(jìn)了系膜細(xì)胞增生，且這種作用在刺激48小時(shí)最為明顯，說明系膜細(xì)胞增殖模型符合實(shí)驗(yàn)要求。
　　2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　2.1HE染色結(jié)果
　　與正常組比較，大黃酸組24h20μmol·L-1細(xì)胞碎片

3、增多，凋亡細(xì)胞產(chǎn)生，細(xì)胞皺縮，胞膜完整，細(xì)胞核固化，密度增大，染色質(zhì)凝聚，嗜堿性增強(qiáng)，細(xì)胞核染成深藍(lán)色；48h時(shí)細(xì)胞已皺縮成團(tuán)細(xì)胞核碎裂成多個(gè)顆粒，胞膜不完整；40μmol·L-1、80μmol·L-1，細(xì)胞嚴(yán)重皺縮成細(xì)長形，貼壁細(xì)胞數(shù)明顯減少，胞核變小且密度增大，染色質(zhì)凝聚，嗜堿性增強(qiáng)，染成深藍(lán)色；48h時(shí)，視野內(nèi)細(xì)胞數(shù)較24h減少更多，細(xì)胞皺縮成團(tuán)，胞核破碎成多個(gè)顆粒，胞膜不完整。大黃素組24h20μmol·L-1細(xì)胞形態(tài)沒有明顯變

4、化；40μmol·L-1時(shí)凋亡細(xì)胞產(chǎn)生，細(xì)胞皺縮但胞膜完整，胞核固化，密度增大，染色質(zhì)凝聚，嗜堿性增強(qiáng)，胞核染成深藍(lán)色；80μmol·L-1，細(xì)胞皺縮成團(tuán)，細(xì)胞數(shù)減少，碎裂成顆粒的細(xì)胞核增多；48h40μmol·L-1時(shí)，細(xì)胞皺縮，細(xì)胞數(shù)減少，部分細(xì)胞核碎裂成顆粒，胞質(zhì)濃染；80μmol·L-1時(shí)視野內(nèi)已找不到完整細(xì)胞核。
　　與大黃素組比較：24h、48h大黃酸低、中、高濃度細(xì)胞形態(tài)的改變較大黃素組明顯。
　　2.2DAP

5、I染色結(jié)果
　　與正常組比較：大黃酸組24h20μmol·L-1時(shí)部分細(xì)胞核染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)，40μmol·L-1時(shí)細(xì)胞核裂解為碎片，完整細(xì)胞核較少，80μmol·L-1時(shí)基本沒有完整細(xì)胞核存在；48h20μmol·L-1時(shí)部分細(xì)胞核裂解為碎片，40μmol·L-1時(shí)完整細(xì)胞核較少，80μmol·L-1視野內(nèi)很難找到完整細(xì)胞核。大黃素組24h20μmol·L-1時(shí)細(xì)胞核無明顯變化，40μmol·L-1完整細(xì)胞核減少，80μmol

6、·L-1產(chǎn)生凋亡小體；48h20μmol·L-1時(shí)，部分高度凝聚，未見細(xì)胞碎片，40μmol·L-1完整細(xì)胞核相對減少，20μmol·L-1時(shí)鏡下很難找到完整細(xì)胞核。
　　與大黃素組比較：隨著時(shí)間及劑量的增加，大黃酸低、中、高濃度組對細(xì)胞核的影響程度均強(qiáng)于大黃素各組。
　　2.3凋亡率檢測結(jié)果
　　24h時(shí)，細(xì)胞早期凋亡率與正常組比較：大黃酸高濃度組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05。
　　24h時(shí)，細(xì)胞晚期凋亡率和壞死

7、細(xì)胞率與正常組比較：大黃酸低、中、高濃度組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05；大黃素高濃度組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05。
　　24h時(shí)，細(xì)胞早期凋亡率組內(nèi)比較：與高濃度組比較，大黃酸低、中濃度組、大黃素高濃度組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05。
　　24h時(shí)，細(xì)胞晚期凋亡率和壞死細(xì)胞率組內(nèi)比較：與低濃度組比較，大黃酸中、高濃度組、大黃素高濃度組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05；與中濃度組比較，大黃酸低、高濃度組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05；與

8、高濃度組比較，大黃酸、大黃素低、中濃度組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05。
　　48h時(shí)，細(xì)胞早期凋亡率與對照組比較：大黃素中濃度組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05。48h時(shí)，細(xì)胞晚期凋亡率和壞死細(xì)胞率與對照組比較：大黃酸低、高濃度組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05；大黃素高濃度組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05。
　　48h時(shí)，細(xì)胞晚期凋亡率和壞死細(xì)胞率組內(nèi)比較：與低濃度比較，大黃酸高濃度組、大黃素高濃度組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05；與中濃度