幾種鐮刀菌的活性檢測(cè)研究.pdf

1、貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文幾種鐮刀菌的活性檢測(cè)研究姓名：黃躍才申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：章桂明;劉作易20080501幾種鐮刀菌的活性檢測(cè)研究病菌北美種活性檢測(cè)技術(shù)，該方法可以替代傳統(tǒng)的孢子萌發(fā)方法，從而大幅度縮短該病菌活性檢測(cè)時(shí)間，明顯提高了檢測(cè)效率，對(duì)檢疫性植物病原真菌活性檢測(cè)新平臺(tái)的建立具有重要的參考價(jià)值。關(guān)鍵詞：鐮刀菌，蛋白，質(zhì)譜分析，大豆猝死綜合癥病菌北美種，熒光染色，活性分析A b s t r a c tF u s

2、 a r i u m w a s ak i n do f f u n g iw i t h g r e a t m o r p h o l o g i c a l v a r i a t i o na n d w i t hh i g he c o n o m i c s i g n i f i c a n c e ．S om a n y a t t e n t i o n sw e r ep a i d o nF u s a r i

3、u mc l a s s i f i c a t i o na n dg r e a te f f o r t sw e r e m a d e ．F u s a r i u mc o u l db ei d e n t i f i e dw i t hm o r p h o l o g i c a lm e t h o d s ，i m m u n o l o g i c a lm e t h o d sa n dm o l e c

4、u l a rm e t h o d s ．B u tt h es a m p l ep r e t r e a t m e n t o f m o r p h o l o g i c a lm e t h o d s W a S c o m p l i c a t e da n dt i m ec o n s u m e d ，a n d t h e r e w e 愆e r o s s - r c a c t i o n s ，h

5、i g h f a l s ep o s i t i v ea n d f a l s en e g a t i v er a t ef o ri m m u n o l o g i c a la n dm o l e c u l a rm e t h o d s ．M a t r i x - a s s i s t e dl a s e rd e s o r p t i o n - i o n i z a t i o nt i m e

6、o ff l i g h tn 姻s p e c t r o m e t r y ( M A L O t T O FM S ) w a s a na n a l y t i c a l c h e m i s t r yt e c h n o l o g y , i t c o u l dp r o v i d e m a s ss p e c t r ac o n t a i n i n gd i f f e r e n tb i o

7、 m a r k e r s s p e c i f i c t ov a r i o u sm i c r o o r g a n i s m ．B a S e d o nt h es p e c t r aw i l h t h em i c r o o r g a n i s ms p e c i f i cb i o m a r k e r s 。t h em i c r o o r g a n i s mc a nb ed e

8、 t e r r e da n di d e n t i f i e d ．M A L D IT O F M S w a s a p p l i e d t om i c r o b i o l o g i c a l a s s a ya n d c l a s s i f i c a t i o nh a ss o m e a d v a n t a g e sc o m p a r e d w i t hc o n v e n t

9、 i o n a l m e t h o d s ： s i m p l ea n dr a p i d , g o o dr e p r o d u c i b i l i t y , p ‘翩 a c c u r a c y , w e l la u t o m a t i o n ，h i g h ·t h r o u g h p u t , a n dS OO I L3 5s t r a i n so f F u s

10、a r i u m o r i g i n a t e df r o mC G M C C ，U S A a n dA r g e n t i n aw e r e u s e df o rM A L D I T O F M Sa n l y s i s ．I I lt h i s s t u d y , F u s a r i u m p r o l i f e r a m mV a r ．m i n u sa n dF u s a

11、r i u mg r a m i n e a r u mw e 糟a n a l y z e db yM A L D I T O F M Su s e df o r s e t t i n gu pag e n e r a ls a m p l ep r e p a r a t i o np r o t o c 0 1 ．T h ep r e s e n ts t u d y m a i n l ye m p l o y st w o

12、d i f f e r e n ts a m p l e p r e p a r a t i o n p r o t o c o l s ：t r e a t i n g f u n g i b ys o l v e n t ( s i n g l e t r e a t m e n t a n dc o m b i n e dt r e a t m e n 0 a n d e n z y m e ( s n a i le n z y

13、m e ) ．A t t h es a l l l et i m e , d i f f e r e n te x p e r i m e n t a lf a c t o r ss u c ha ss o l v e n t s y s t e m u s e d , m a t r i x ，s o l v e n t o fm a t r i x , f I l 嶇q u a n t i f i e s ，s a m p l ea

14、 p p l i c a t i o n m e t h o d , s a m p l ea p p l i c a t i o nq u a n t i t i e s ，t i m e so fw a S h i n g ，u l t r a s o n i c t r e a t m e n tt i m ew e ∞i n v e s t i g a t e d ．T h er o l eo fd i f f e r e n

15、tf a c t o r s i n s a m p l ep r e p a r a t i o n W a Ss y s t e m a t i c a l l y i l l u m i n a t e d ．T h eo p t i m u l l le x p e r i m e m t a lc o n d i t i o nf o ra n a l y s i so fF u s a r i u mb y M A L D

16、I T O F M S w a sg o tf o rt h ef i r s tt i m e ：t h e o p t i m u m s o l v e n tf o rm y c e l i u mt r e a t m e n tw a g7 0 0 f o r m i ca c i d ：a c e t o n i t r i l e ．T h eo p t i m u m m a 缸i xa n ds o l v e n

17、to f m a t r i x w e r eH C C A a n d5 0 A C N ：T F A ：w a t e r ( 2 0 ：1 ：1 9 ) ．T h eo p t i m u ma m o u n to fm y c e l i u mW a S a b o u t8 m g ．T h eo p t i m u ms a m p l ea p p l i c a t i o nw 勰i m p r o v e dd

18、 r i e dd r o p l e tm e t h o d ．T h eo p t i m u m s a m p l ea p p l i c a t i o nq u a n t i t yw a sl 一．T h eo p a m m t i m e so fw a s h i n gw e r e 鋤o e ．T h e o p t i l n u l l lu l t r a s o n i cb ' ℃a t

19、m e n t6 皿屺w a s lOm m ．T h i sp r o t o c o lc o d db e 瑚e d t o d i f f e r e n t i a t et h e f u n g ii nd i f f e r e n ts p e c i 銷o f F u s a r i u ma n dd i f f e r e n ts W a i n so fF u s a r i u m蜊／f o r m e a