農藥殘留檢測用植物酯酶的篩選與固定化研究.pdf

1、本研究基于酶法分析中的酶抑制原理，對農藥殘留檢測用植物酯酶制劑進行研究。首先以傳統(tǒng)植物酯酶提取材料小麥為實驗材料，設計單因子試驗，篩選并優(yōu)化提取液種類、料液比、提取時間、離心速度等條件，得到植物酯酶的最佳提取工藝。然后擴大植物酶源的選材范圍，通過對11種植物種子及2種植物加工材料總酯酶活力與比活力進行比較，篩選農藥殘留檢測用適宜的植物酯酶。將該植物酯酶與家蠅乙酰膽堿酯酶進行比較，確定其開發(fā)利用的價值。用該酯酶對6種有機磷及氨基甲酸酯類農

2、藥敵敵畏、辛硫磷、敵百蟲、速滅威、克百威、滅多威進行敏感性分析，確定其開發(fā)利用的可行性。最后對該酯酶進行初步的純化和固定化，為植物酯酶制劑的開發(fā)奠定基礎。其主要研究結果如下： 1.植物酯酶的適宜提取工藝：當年生新鮮植物種子或材料，粉碎(過100目篩)，按料液比1：5，加入0.2mol/L、pH6.5的磷酸鹽緩沖液，4℃下浸泡16h，4層紗布過濾，4℃下，10000r/min離心10min。 2.在小麥、油菜、蘿卜、花

3、生、黃豆、綠豆、蕓豆、紅小豆、冰豆、葵花籽、花豇豆11種植物種子及面粉、麥麩和家蠅等材料中，花豇豆的總酯酶活力及比活力極顯著高于其它植物酯酶和家蠅。其總酯酶活力為14.695U，比活力為1.219 U/mg，而且易于獲取，提取方便，成本低，故以此作為農藥殘留檢測用植物酯酶是適宜的。 3.用花豇豆酯酶對6種有機磷及氨基甲酸酯類農藥敵敵畏、辛硫磷、敵百蟲、速滅威、克百威、滅多威的敏感性測定分析得出：花豇豆酯酶對有機磷類農藥敵百蟲的

4、敏感性最好，其次為對敵敵畏的敏感性，對辛硫磷的敏感性最低，而對氨基甲酸酯類農藥的敏感性普遍較低，所測農藥的濃度與對花豇豆酯酶抑制率間相關性較好，決定系數(shù)都在0.9423以上，符合檢測要求。 4.花豇豆酯酶經初步純化后，比活力和純化倍數(shù)都有所提高。60％硫酸銨沉淀分離得到的花豇豆酯酶，比活力為原來的2.743倍，活性回收率為原來的2.420倍，經透析濃縮后比活力為原來的4.214倍，活性回收率為原來的3.460倍。 5