卵巢癌人源單鏈抗體庫的構(gòu)建及功能蛋白的篩選.pdf

1、目的：構(gòu)建卵巢癌人源單鏈抗體庫并運(yùn)用核糖體展示技術(shù)對其進(jìn)行篩選。
　　 方法：從8名卵巢癌患者志愿者抽取血樣，應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液分離外周血淋巴細(xì)胞，提取總RNA，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)增人全套重鏈可變區(qū)基因和輕鏈可變區(qū)基因，并對它們進(jìn)行拼接；選取人胎盤生長因子(human placentalgrowth factor，PLGF)作為目標(biāo)抗原對該單鏈抗體庫進(jìn)行核糖體展示篩選研究；雙酶切技術(shù)將anti-PLGF單鏈抗體基

2、因連入表達(dá)載體(pET-30(a)+)并轉(zhuǎn)化E.coliBL21進(jìn)行表達(dá)，在LB培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)12小時，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)6小時，收獲菌體，收集細(xì)菌進(jìn)行裂解，對所獲得蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測。
　　 結(jié)果：
　　 1、成功構(gòu)建卵巢癌人源單鏈抗體庫，庫容量為6.5×1013，經(jīng)測序分析10個陽性重組子的序列，判斷該抗體庫豐富多樣；
　　 2、經(jīng)過3輪篩選，獲得anti-PLGF單鏈抗體基因，經(jīng)大腸桿菌克