缺鋅對(duì)后代和成年大鼠BCG、ESAT-6-CFP-10免疫應(yīng)答作用的初步研究.pdf

1、結(jié)核病是一種在感染、免疫、預(yù)防和治療等方面充滿矛盾和挑戰(zhàn)的慢性傳染病。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全世界約有20億人感染結(jié)核分枝桿菌(MTB)。我國是結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，結(jié)核患者人數(shù)居世界第二位。結(jié)核病已成為當(dāng)前威脅人類生命健康的嚴(yán)重傳染性疾病?？ń槊?BCG)是目前世界上使用最廣泛的疫苗，雖然被廣泛用于結(jié)核病預(yù)防，但其效果仍不夠滿意?？ń槊缈梢灶A(yù)防并減輕兒童的嚴(yán)重結(jié)核病，有效率高達(dá)80％，但對(duì)成人的保護(hù)能力要弱得多。前期的研究也發(fā)現(xiàn)，在成人和老人

2、中，BCG對(duì)肺結(jié)核預(yù)防的有效性是極不確定的。
　　近年來研究發(fā)現(xiàn)，缺鋅的地區(qū)結(jié)核病的發(fā)病率較高，肺結(jié)核患者的血清鋅水平比正常人低，這一現(xiàn)象引起本研究小組的興趣，推測(cè)鋅可能與結(jié)核病有一定的關(guān)聯(lián)。鋅對(duì)人類免疫功能的多個(gè)方面產(chǎn)生影響。鋅在體內(nèi)的吸收、分布和代謝都與鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體密不可分，其中鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體ZIP2和ZIP8與感染炎癥有一定的相關(guān)性。
　　早期分泌抗原靶蛋白6（Early secretory antigen target-6，E

3、SAT-6）和培養(yǎng)濾液蛋白10(Culture filtrate protein10，CFP-10)僅存在于致病性結(jié)核分枝桿菌和牛分枝桿菌中，能誘導(dǎo)有效的Th1應(yīng)答，并具有對(duì)肺結(jié)核的特異性保護(hù)力，已經(jīng)成為肺結(jié)核免疫診斷和疫苗研究中最有力的候選抗原之一。
　　第一部分 缺鋅對(duì)后代和成年大鼠BCG、ESAT-6/CFP-10免疫應(yīng)答的影響
　　目的:
　　通過在孕期、幼年期或成年期用正?；蛉变\飼料喂養(yǎng)大鼠，在不同時(shí)間免疫動(dòng)

4、物，探討缺鋅和疫苗接種時(shí)間對(duì)BCG和ESAT-6/CFP-10免疫應(yīng)答作用的影響。
　　方法:
　　在確認(rèn)懷孕的當(dāng)天，將32只懷孕的Wistar大鼠隨機(jī)分為兩組:正常組(NC)和缺鋅組(ZnD)。孕期正常組大鼠給予正常飲食（飼料鋅含量30mg/kg）;缺鋅組大鼠給予缺鋅飲食(飼料鋅含量8mg/kg)。孕鼠所生的后代鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
　　將32只10周齡的雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為兩組:正常組(NC)和缺鋅組(ZnD)

5、。正常組大鼠每天給予正常含鋅飲食(飼料鋅含量30mg/kg);缺鋅組大鼠每天給予缺鋅飲食(飼料鋅含量8mg/kg)，持續(xù)喂養(yǎng)17周。
　　后代鼠出生的第0和第2周、成年大鼠喂養(yǎng)的第12和14周，分別用BCG或ESAT-6/CFP-10免疫大鼠。第二次疫苗接種3周后將動(dòng)物處死，進(jìn)行免疫檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1.BCG和ESAT-6/CFP-10缺鋅大鼠血漿鋅離子含量、INF-γ、TNF-α表達(dá)低于正常組。缺鋅幼年大鼠臟

6、器系數(shù)、淋巴細(xì)胞增殖能力明顯低于正常組。缺鋅大鼠免疫器官ZIP2、ZIP8、NF-κB和IL-6 mRNA表達(dá)發(fā)生改變。
　　2.正常成年大鼠血淋巴細(xì)胞ZIP2和ZIP8 mRNA低于正常幼年大鼠;正常成年大鼠的血淋巴細(xì)胞、脾臟中NF-κB mRNA的低于正常幼年大鼠;正常幼年大鼠IL-6 mRNA高于正常成年大鼠。
　　3.正常BCG幼年大鼠胸腺和脾臟ZIP2、ZIP8 mRNA高于正常ESAT-6/CFP-10大鼠。正常

7、BCG幼年大鼠血淋巴細(xì)胞和脾臟NF-κB mRNA高于正常ESAT-6/CFP-10大鼠。IL-6 mRNA在缺鋅BCG幼年大鼠血淋巴細(xì)胞和脾臟中比缺鋅ESAT-6/CFP-10大鼠有較高表達(dá)，在正常BCG幼年大鼠脾臟中比正常ESAT-6/CFP-10大鼠有較高表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　缺鋅降低機(jī)體對(duì)BCG、ESAT-6/CFP-10的免疫作用。BCG的接種時(shí)間可能對(duì)免疫應(yīng)答有一定影響。ESAT-6/CFP-10可能在提高大鼠

8、的免疫力方面有一定作用。
　　第二部分 鋅對(duì)A-549細(xì)胞鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)以及對(duì)ESAT-6/CFP-10免疫應(yīng)答作用的影響
　　目的:
　　缺、加鋅處理A-549細(xì)胞，探討低鋅和高鋅處理對(duì)細(xì)胞鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)以及對(duì)ESAT-6/CFP-10免疫應(yīng)答作用的影響。
　　方法:
　　1.缺鋅、高鋅處理，24h后收集細(xì)胞。
　　2.A-549細(xì)胞缺、加鋅處理24h后，各梯度分別加入ESAT6/CFP-1010μ

9、l/ml，刺激24h后收集細(xì)胞。
　　3.ZIP8、NF-κB過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A-549細(xì)胞，轉(zhuǎn)染24小時(shí)后加入ESAT-6/CFP-1010μl/ml，刺激24h后收集細(xì)胞。
　　結(jié)果:
　　1.低濃度ZnCl2和TPEN對(duì)A-549細(xì)胞生長均有明顯的抑制作用。
　　2.高鋅時(shí)，ZIP2、ZIP8和NF-κB mRNA表達(dá)先降低后升高;缺鋅時(shí)，ZIP2 mRNA的表達(dá)先升高后降低，ZIP8和NF-κB mRNA的

10、表達(dá)先降低后升高。
　　3.抗原刺激時(shí)，ZIP8 mRNA高鋅時(shí)顯著上升，低鋅時(shí)顯著降低。高鋅時(shí)，NF-κBmRNA表達(dá)下降;ZIP2 mRNA表達(dá)先上升后下降。低鋅條件下，ZIP2 mRNA表達(dá)下降;NF-κB mRNA表達(dá)先升高后降低。
　　4.抗原刺激同時(shí)NF-κB過表達(dá)，ZIP2 mRNA表達(dá)降低，ZIP8 mRNA和蛋白表達(dá)顯著增加。
　　結(jié)論:
　　高鋅和低鋅對(duì)A-549細(xì)胞的生長都有抑制作用。高、低