α-磷酸葡萄糖變位酶基因pgm2的克隆表達及功能研究.pdf

1、分類號：Q78密級：不保密學校代碼：10057研究生學號：12841007a磷酸葡萄糖變位酶基因pgm2的克隆表達及功能研究Cloning，ExpressionandFunctionStudiesofaPhosphoglucomutaseGeneapgm2專業(yè)名稱：指導教師姓名：研究生姓名：申請學位級別：論文提交日期：論文課題來源：學位授予單位：生物化學與分子生物學王艷萍教授崔月倩理學碩士2015年03月國家自然科學基金天津科技大學摘要

2、本實驗室前期從西藏Kefir粒中分離得到一株具有高產(chǎn)胞外多糖的馬奶酒樣乳桿菌ZW3，該菌具有良好的益生功能，在優(yōu)化的改良MRS培養(yǎng)基中，胞外多糖最高產(chǎn)量達2000mg／L以上，產(chǎn)生的胞外多糖具有較好的理化性質(zhì)，是一株可用于食品，醫(yī)藥等多種領(lǐng)域的菌株。本論文以馬奶酒樣乳桿菌ZW3為研究對象，通過前期對其全基因組測序，對得到的結(jié)果進行分析，發(fā)現(xiàn)該菌株含有一個21lMb的環(huán)狀染色體以及兩個大小分別為194，769bp(pWWl)和46，296

3、bp(pWW2)的質(zhì)粒，還發(fā)現(xiàn)在馬奶酒樣乳桿菌ZW3染色體，有一段144kb的胞外多糖基因簇，攜帶17個多糖合成相關(guān)基因，及許多胞外多糖合成通路中的編碼胞外多糖代謝通路中代謝關(guān)鍵酶的管家基因pgm2，gaIEgalK等。為了研究馬奶酒樣乳桿菌ZW3的代謝通路，尋找高效胞外多糖產(chǎn)糖通路，以及構(gòu)建過表達菌株高產(chǎn)胞外多糖，以馬奶酒樣乳桿菌ZW3染色體為模板，利用設(shè)計的引物對代謝管家基因pgm2進行了擴增，構(gòu)建人腸桿菌重組質(zhì)粒pET30apgm

4、2，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中，并成功進行了表達。同時，構(gòu)建構(gòu)建了乳酸菌重組質(zhì)粒pMG36epgm2，轉(zhuǎn)化至馬奶酒樣乳桿菌ZW3菌株中，成功構(gòu)建了過表達菌株，并對馬奶酒樣乳桿菌ZW3野生菌以及其轉(zhuǎn)化菌株進行生長特性分析。針對已經(jīng)轉(zhuǎn)化成功的重組菌株，以野生菌馬奶酒樣乳桿菌ZW3為對照，利用苯酚硫酸法檢測兩者的胞外多糖產(chǎn)量，結(jié)果顯示胞外多糖產(chǎn)量提高了2016％。根據(jù)SDS—PAGE電泳圖譜可初步確定0【一磷酸葡萄糖變位酶基pgm2在大腸桿菌以及馬奶酒