膿毒癥患者血清miRNAs全基因組篩選及對患者預后的評價研究.pdf

1、目的：本實驗旨在利用Solexa測序技術在全基因范圍內(nèi)篩選可以用來預測膿毒癥預后的血清miRNAs，并利用生物信息學軟件預測新的miRNAs。
　　 方法：收錄2009年9月15日到2010年11月20日在中國人民解放軍總醫(yī)院呼吸重癥監(jiān)護病房、急診重癥監(jiān)護病房和外科重癥監(jiān)護病房住院患者，滿足膿毒癥兩項及兩項以上條件的感染患者94例。按照28天病死率，生存患者51例，死亡患者43例，并以24名健康人血清作為對照。采集第1天的血清，

2、并記錄對應時間的生命體征、CRP、PCT、血常規(guī)、生化、凝血及動脈血氣。然后，選取生存患者與死亡患者各9例，組成兩個血清池行solexa測序分析。利用qRT-PCR驗證測序篩選的差異表達的miRNAs，對有差異的miRNAs進行ROC曲線分析，比較AUC面積。最后將上述篩選的miRNAs和常用指標包括CRP,PCT，APECHE II評分和SOFA評分均納入二分類變量logistic回歸分析，篩選同膿毒癥預后相關的因素。對最終篩選的mi

3、RNAs進行靶基因預測與KEGG通路注釋，預測其參與膿毒癥發(fā)病的機制。另外，利用生物信息學軟件預測新的miRNAs。
　　 結果：經(jīng)過Solexa測序后篩選出12種差異表達的miRNAs，選取同膿毒癥相關的6種miRNAs(miR-206,miR-378,miR-223,miR-15b,miR-15a,miR-16)進行qRT-PCR驗證。驗證后本研究的主要結果如下：(1) miR-223，miR-15b和miR-16在兩組之間

4、差異有統(tǒng)計學意義，p值分別為0.002，0.008和0.009，并且這三種miRNAs的表達水平生存組高于正常組，死亡組低于正常組；(2)將這三種miRNAs同CRP，PCT，APECHE II評分和SOFA評分進行ROC曲線分析，比較曲線下面積結果示miR-16的AUC是0.847(95％CI，0.763-0.932)，高于APECHE II評分和SOFA評分的AUC0.813(95%CI，0.721-0.906)，0.807(95%

5、CI，0.712-0.902)。miR-223的AUC是0.768(95%CI，0.661-0.874)高于CRP和PCT的曲線下面積；(3)將這三種miRNAs與膿毒癥患者的性別，年齡，APECHE Il評分，SOFA評分，CRP，PCT，白細胞計數(shù)，體溫和伴隨疾?。ǜ哐獕海悄虿?，冠心病和免疫抑制）納入二分類變量單因素Logistic回歸分析，以p<0.05作為篩選標準，三種miRNAs與APECHE II評分，SOFA評分，PCT

6、均入選而納入二分類變量多因素回歸分析，結果示這三種miRNAs與APECHEII評分，SOFA評分進入最后的回歸方程。miR-223和miR-16的OR分別是0.212(95%CI，0.062-0.734)和0.135(95%CI，0.025-0.727)，說明miR-223和miR-16是膿毒癥患者獨立的保護因子。APECHE II評分和SOFA評分的OR分別是1.212(95%CI，1.046-1.403)和1.518(95%CI，

7、1.083-2.127)，二者是膿毒癥患者預后的危險因子；(4)將這六個miRNAs的表達水平在正常組，生存組和死亡組之間進行one-way ANOVA分析示miR-15b，miR-15a和miR-16在三組間有表達差異，p值分別是0.023，0.008，和0.017。miR-15a的表達水平在生存組與死亡組均高于正常組。進一步將病例分為正常組(n-24)和膿毒癥組(n=76)進行t檢驗，結果示miR-223與miR-15a在兩組間差異

8、有統(tǒng)計學意義，而miR-15a診斷膿毒癥的AUC是0.853(95%CI，0.768-0.938)，當miR-15a的表達水平是0.034時，miR-15a診斷膿毒癥的特異性是75.0%，敏感性是86.8%。這些數(shù)據(jù)顯示miR-15a是膿毒癥的新的血清標記物。生物信息學分析顯爾，ACVR2A和MAP2K1是這三種miRNAs預測的靶基因。
　　 結論：
　　 1．miR-223，miR-15b和miR-16可以用來評價膿