2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過建立紅藤水提物的高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromaterygraphy,HPLC)的分析方法,采用人單核巨噬細胞U937細胞經(jīng)過脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)刺激模擬疾病炎癥過程,觀察紅藤水提物的治療效果,探討紅藤水提物對炎癥反應的調(diào)控作用,為臨床治療疾病提供實驗支持。
  方法:⑴使用HPLC法檢測紅藤水提物中紅景天苷、蘆丁的含量,建立紅藤水提物成分的

2、HPLC分析方法,達到質(zhì)量控制目的。⑵采用LPS誘導模擬炎癥反應,Real-time PCR法檢測NRF2及炎性細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10的mRNA表達;Western Blot來檢測NRF2/ARE信號通路中NRF2、Keap1及HO-1和Akt/NF-κB信號通路中的NF-κB p65、IKK、IκB表達以及Akt、p38 MAPK、ERK1/2、JNK的活化水平;免疫熒光法檢測NRF2的核轉(zhuǎn)位。
  結果:①

3、HPLC法檢測紅藤水提物中的紅景天苷1.059 mg/g,蘆丁的含量為0.5611mg/g。②Real-time PCR法顯示,與對照組相比,LPS1μg/mL組中的炎性細胞因子因子TNF-α、IL-1β、IL-10表達上升;與LPS1μg/mL組相比,紅藤水提物干預后TNF-α、IL-1β、IL-10表達下調(diào),呈濃度依賴性。③Western Blot法和Real-time PCR法實驗結果顯示,與LPS1μg/mL組相比較,紅藤水提物

4、1 mg/mL和2 mg/mL干預后的NRF2,HO-1的表達增加,Keap1的表達明顯降低,呈濃度依賴。在1h、3h中,與對照組相比,LPS1μg/mL組的NRF2表達增加;與LPS1μg/mL組相比,紅藤水提物1 mg/mL組中的NRF2表達明顯減少;在6h、12h、24 h中,與LPS1μg/mL組對比,紅藤1 mg/mL組中的NRF2的表達量上升。在紅藤水提物干預24 h中,與LPS1μg/mL組相比較,紅藤水提物1 mg/mL

5、組中的Keap1表達減少,呈時間依賴性。在12h、24 h中,與LPS1μg/mL組對比,紅藤水提物1 mg/mL組的HO-1表達增加。在核轉(zhuǎn)位的實驗中,觀察到LPS1μg/mL組中NRF2的核轉(zhuǎn)位明顯低于對照組和紅藤1mg/mL組。④Western Blot法顯示,與對照組相比,在3h、6h中,LPS1μg/mL組的NF-κB p65、IKK、IκB表達上調(diào);與LPS1μg/mL組相比,紅藤水提物1 mg/mL組的NF-κB p65、

6、IKK、IκB的表達下調(diào);在12h的LPS1μg/mL組和紅藤水提物1 mg/mL組的NF-κBp65、IKK、IκB的表達相反,即LPS模型組中NF-κB p65、IKK、IκB的表達下調(diào),紅藤水提物組的表達增加。在LPS刺激的120 min中,與對照組相比,LPS1μg/mL組Akt的磷酸化水平增加;與LPS1μg/mL組相比,紅藤水提物1 mg/mL組Akt的磷酸化水平的下調(diào),呈時間依賴性。⑤紅藤水提物干預的短時間中,Wester

7、n Blot結果顯示,在5 min、15 min、30 min、60 min、120 min中,LPS1μg/mL刺激后JNK、P38 MAPK的活化增加,紅藤水提物干預后JNK、P38 MAPK磷酸化水平降低。相反的是,紅藤水提物干預后ERK1/2的磷酸化水平升高。
  結論:⑴確立了紅藤水提物的HPLC分析方法,測得紅藤水提物中的紅景天苷1.059mg/g,蘆丁的含量為0.5611mg/g。⑵紅藤水提物顯著抑制細胞炎性因子TN

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