異煙肼在小鼠不同臟器中對Nrf2-ARE信號通路抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、根據(jù)我國腫瘤登記中心發(fā)布的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，我國癌癥的發(fā)病率及死亡率逐年上升。不僅在我國，從世界范圍來看，癌癥已成為危害世界最嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。癌癥的治療手段多樣，如手術(shù)切除、化療、介入、生物免疫和中藥等，作為癌癥治療手段之一的化療，可最大程度的殺滅體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞，尤其對于晚期腫瘤患者，因此化療在惡性腫瘤的治療中占有特別重要的地位?？萍嫉倪M(jìn)步使新的化療藥物不斷出現(xiàn)，但是腫瘤患者的臨床療效并未明顯的改善。大量研究發(fā)現(xiàn)，影響化療療效的原因眾多

2、，但其主要原因歸咎于腫瘤化療耐藥性。雖然影響腫瘤化療耐藥性的原因有很多，但主要機(jī)制或核心部分并未被發(fā)現(xiàn)。因此，探索腫瘤耐藥機(jī)制已成為目前腫瘤研究的熱點(diǎn)。最新研究發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致腫瘤化療耐藥的原因與Nrf2-ARE信號通路關(guān)系密切。一旦該信號通路被激活后將會導(dǎo)致解毒酶、抗氧化酶和藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的大量生成，共同介導(dǎo)腫瘤的化療敏感性。且細(xì)胞核內(nèi)受ARE介導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄是影響腫瘤化療耐藥的關(guān)鍵。因此，篩選Nrf2-ARE信號通路的抑制劑是逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性的

3、重要策略，由此提高腫瘤的化療敏感性，最終改善惡性腫瘤患者的預(yù)后。
　　目的：
　　有研究發(fā)現(xiàn)異煙肼(Isoniazid，INH)能夠抑制多種小鼠和人的細(xì)胞系Nrf2-ARE信號通路，但I(xiàn)NH對Nrf2-ARE作用的體內(nèi)研究未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)將研究INH以不同劑量和不同時(shí)間處理小鼠后，檢測肝臟和腎臟中Nrf2及其下游基因的表達(dá)水平，來探索INH對肝臟和腎臟中Nrf2-ARE信號通路的作用，為后續(xù)INH作為Nrf2抑制劑提高化療敏

4、感性提供動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　購自中國醫(yī)科大學(xué)動物部的C57BL/6小鼠，6-8周齡，體重20-25 g。將100mg/kg體重的INH通過經(jīng)口灌胃的方式注入小鼠體內(nèi)，分別檢測6h和12h時(shí)，小鼠肝臟和腎臟中Nrf2及其下游基因的表達(dá)水平，探索INH在該臟器中對Nrf2-ARE信號通路有無抑制作用。若存在抑制作用，將獲得抑制作用最強(qiáng)時(shí)間點(diǎn)，再選用25 mg/kg體重的INH，驗(yàn)證低劑量的INH在該時(shí)間點(diǎn)是否同樣

5、具有抑制作用。
　　qPCR方法檢測:將小鼠處死后，摘取其肝臟和腎臟，提取目標(biāo)組織中的總RNA，統(tǒng)一稀釋相同濃度后逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA，將Gapdh基因片段設(shè)為待測基因的內(nèi)參，即Nrf2、Gclc、Gclm、Nqo1和Ho-1基因。統(tǒng)計(jì)方法采用單因素方差分析，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　100 mg/kg體重的INH對小鼠肝臟和腎臟中受ARE介導(dǎo)的基因有抑制作用，12h時(shí)抑制效果最明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;6h