病毒基因組連接蛋白影響煙草脈帶花葉病毒致病性的機(jī)制.pdf

1、馬鈴薯Y病毒屬（Potyvirus）病毒的基因組連接蛋白(viral genome-linked protein，VPg)是一個多功能蛋白，通過與多個寄主因子及病毒蛋白互作參與病毒的復(fù)制，細(xì)胞間移動及長距離移動等過程。VPg共價結(jié)合于病毒基因組RNA的5'端，位于線狀病毒粒子的末端。
　　 煙草脈帶花葉病毒（Tobacco vein banding mosaic virus，TVBMV）屬于馬鈴薯Y病毒屬，近年來在我國煙草上的發(fā)

2、生有上升和蔓延的趨勢。本研究以攜帶綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)的TVBMV cDNA侵染性克隆(pCamTVBMV-GFP)為載體，通過定點突變獲得了TVBMV VPg的29個突變體，利用農(nóng)桿菌共浸潤的方法分析了這些突變對TVBMV致病性的影響，并通過酵母雙雜交(YTHS)和雙分子熒光互補(bǔ)(BiFC)技術(shù)分析了VPg及其突變體與eIF(iso)4E互作的情況。主要結(jié)果如下:
　　 V

3、Pg第42位和45位的賴氨酸(Lys)分別突變?yōu)楸彼?Ala)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gin)得到的6個突變體(K42A、K42E、K42Q、K45A、K45E、K45Q)和第178位絲氨酸(Ser)突變?yōu)锳la、 Glu、Lys的3個突變體(S178A、S178E、S178K)在本氏煙上的致病力與野生型病毒的一致，但K42A和K45E在普通煙上病毒濃度比野生型病毒低得多。第54位的甘氨酸(Gly)突變?yōu)锳la、Glu、精氨酸(

4、Arg)后(G54A、G54E、G54R)均導(dǎo)致病毒在本氏煙及普通煙上的致病力顯著降低。
　　 VPg第10位的亮氨酸(Leu)、第40位和第64位的的酪氨酸(Tyr)分別突變?yōu)锳la、天冬氨酸(Asp)、Arg后(L10A、L10D、L10R、Y40A、Y40D、Y40R、Y64A、Y64D、Y64R)突變體喪失長距離移動的能力，Y40D、Y40R不能進(jìn)行細(xì)胞間移動。VPg中與TVBMV基因組RNA相連的第64位Ty突變?yōu)锳l

5、a、Asp、Arg后(Y64A、Y64D、Y64R)突變體喪失在浸潤葉片中的復(fù)制能力，突變?yōu)閹в斜江h(huán)的苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Trp)后(Y64F、Y64W)病毒依然不能復(fù)制，說明在第64位的酪氨酸對病毒復(fù)制是必需的。
　　 VPg第183位的Leu突變?yōu)锳la和Lys(L183A、L183K)會使病毒的致病力增強(qiáng)，124位的Leu突變?yōu)锳la(L124A)會使病毒的致病力減弱，而183位的Leu突變?yōu)镚lu(L183E)、

6、119位的Tyr突變?yōu)锳la(Y119A)以及119位和124位同時突變?yōu)锳la(Y119A-L124A)均導(dǎo)致病毒在本氏煙中不能復(fù)制。
　　 TVBMV VPg可以自身互作，而導(dǎo)致不能長距離移動的突變體的自身互作能力與野生型VPg相比下降。TVBMV VPg在酵母體內(nèi)和植物體內(nèi)均能夠與eIF(iso)4E-2特異性地互作，但不能與eIF4E和eIF(iso)4E-1互作，影響病毒復(fù)制的突變體VPg均不能與eIF(iso)4E-