莫諾苷對SK-N-SH細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：建立SK-N-SH細(xì)胞的過氧化氫（hydrogen peroxide，H2O2）的氧化損傷模型，初步探討莫諾苷對細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。
　　方法：
　　1.采用對數(shù)生長期的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤（SK-N-SH）細(xì)胞，給予不同濃度的莫諾苷（1μM，10μM和100μM）預(yù)處理24h，加入H2O2（200-400μM）作用24h以誘導(dǎo)細(xì)胞損傷。
　　2.在倒置相差顯微鏡下觀察各組SK-N-SH細(xì)胞的生長和形態(tài)學(xué)變化。

2、r>　　3.用MTT法檢測細(xì)胞存活率；乳酸脫氫酶（LDH）細(xì)胞毒性檢測試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)LDH的釋放量；脂質(zhì)氧化（MDA）檢測試劑盒檢測細(xì)胞脂質(zhì)氧化水平；超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)SOD的含量。
　　4.以活性氧（ROS）檢測試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的生成；超氧化物陰離子熒光探針（Dihydroethidium）檢測細(xì)胞內(nèi)超氧化物陰離子的水平。
　　5.應(yīng)用線粒體膜電位檢測試劑盒（JC-1）檢測線粒體膜電位（△

3、Ψm）的變化；采用分光光度法檢測細(xì)胞內(nèi)Caspase-3活性。
　　6.通過流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、Hoechst染色分析細(xì)胞凋亡。
　　7.利用Western blot檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。
　　8.利用RT-PCR檢測凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.MTT細(xì)胞活力檢測結(jié)果顯示，H2O2可降低SK-N-SH細(xì)胞活力，并呈現(xiàn)出劑量和時間依賴的關(guān)系。經(jīng)過H2O2（200μM）處理24h后，細(xì)

4、胞活力較對照組顯著降低，而莫諾苷能明顯抑制H2O2導(dǎo)致的SK-N-SH細(xì)胞活力下降。
　　2.形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示，經(jīng)過H2O2（200μM）處理24h后，SK-N-SH細(xì)胞可出現(xiàn)突起消失、胞體腫脹圓縮、部分細(xì)胞發(fā)生聚集并破裂成細(xì)胞碎片等顯著的形態(tài)學(xué)變化；而莫諾苷的預(yù)處理能夠減輕這一損傷變化。
　　3.LDH細(xì)胞毒性檢測結(jié)果表明，莫諾苷可減少胞內(nèi)酶LDH的釋放。
　　4.流式細(xì)胞術(shù)和Hoechst染色的結(jié)果表明，莫諾苷可顯著

5、抑制H2O2誘導(dǎo)的SK-N-SH細(xì)胞凋亡。
　　5.DCFH-DA和Dihydroethidium熒光探針檢測結(jié)果顯示，莫諾苷可有效抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS蓄積。
　　6.脂質(zhì)氧化檢測結(jié)果表明，莫諾苷可抑制細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)發(fā)生過氧化；SOD的檢測表明，莫諾苷可顯著抑制H2O2誘導(dǎo)的SOD含量的下降。
　　7.JC-1熒光探針和分光光度法的結(jié)果顯示，莫諾苷可顯著抑制H2O2誘導(dǎo)的SK-N-SH細(xì)胞線粒體膜電位的下降以及