富氫水對(duì)小鼠UUO模型腎纖維化的作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分富氫水對(duì)小鼠UUO模型腎纖維化的作用
　　目的:研究富氫水對(duì)小鼠UUO模型腎纖維化的保護(hù)作用。
　　方法:通過(guò)結(jié)扎 balb/c小鼠右側(cè)輸尿管建立單側(cè)輸尿管梗阻（Unilateral Ureteral Obstruction，UUO）模型。將小鼠隨機(jī)分為正常組(Normal)、假手術(shù)組(Sham)、UUO組及UUO富氫水處理組（UUO+HW）。術(shù)后第10天檢測(cè)小鼠血肌酐（Scr）及尿素氮（BUN）；腎組織 H.E.染

2、色，觀察其纖維化改變；免疫組化檢測(cè)腎組織α-SMA表達(dá)水平； Western-blot檢測(cè)各組腎組織原漿中α-SMA改變。
　　結(jié)果：血生化結(jié)果表明，Normal組和Sham組之間Scr和BUN水平無(wú)明顯差異，UUO組Scr和BUN水平明顯高于Normal組及Sham組（P<0.05），HW+UUO組BUN水平則明顯低于UUO組（P<0.05），Scr水平也變現(xiàn)出一定程度的降低（P<0.1）。H.E.染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Normal組與

3、Sham組顯微鏡下腎小球、腎間質(zhì)并無(wú)明顯變化，而UUO組中，小鼠腎間質(zhì)纖維化及腎小球損傷明顯，HW+UUO組中，間質(zhì)纖維化及腎小球損傷程度較UUO組有所減輕。免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)UUO組α-SMA大量表達(dá)于腎間質(zhì)及腎小球基底膜，而HW+UUO組中腎間質(zhì)只有較少部分出現(xiàn)染色，部分腎小球基底膜有染色。Western-blot結(jié)果顯示，Normal組和Sham組小鼠腎組織原漿中α-SMA表達(dá)無(wú)明顯差異，UUO組α-SMA水平顯著高于Norma

4、l組（P＜0.05），UUO+HW組α-SMA水平較UUO降低明顯（P＜0.05），較Normal組升高無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）
　　結(jié)論：富氫水可減輕小鼠UUO模型腎纖維化程度。
　　第二部分富氫水抑制腎纖維化的作用機(jī)制
　　目的:研究富氫水是否通過(guò)調(diào)控Sirt-1，發(fā)揮抗腎纖維化的作用，并探索富氫水對(duì)經(jīng)典TGF-β1/Smad2通路的影響。
　　方法:將HK-2細(xì)胞分為正常組（Control），富氫水處理

5、組（HW），TGF-β1組，TGF-β1+富氫水處理組（HW+TGF-β1），抑制劑組（HW+TGF-β1+Sirtinol），Western-blot檢測(cè)各組中α-SMA、Fibronectin、E-cadherin、Smad2、Sirt-1的表達(dá)。并在HW+TGF-β1組使用 Sirt-1的抑制劑，觀察此時(shí)腎纖維化標(biāo)志物α-SMA、Fibronectin、E-cadherin表達(dá)，以進(jìn)一步探究富氫水發(fā)揮作用的機(jī)制。
　　結(jié)果:

6、Western-blot結(jié)果顯示：HW+TGF-β1組中，α-SMA及Fibronectin表達(dá)較TGF-β1組顯著降低（α-SMA P<0.05；Fibronectin，P<0.05），E-cadherin表達(dá)較TGF-β1組有明顯提高（P＜0.05）。HW組與 Control組相比，Sirt-1表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。TGF-β1組中，Sirt-1表達(dá)較HW+TGF-β1組（P＜0.05）及Control組（P＜0.0

7、5）顯著降低。HW+TGF-β1組中，Sirt-1表達(dá)略低于Control組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。HW+TGF-β1+Sirtinol組中，E-cadherin表達(dá)與HW+TGF-β1組相比顯著降低（P＜0.05），較TGF-β1組無(wú)明顯差異（P>0.05）。對(duì)經(jīng)典的TGF-β1/Smad2通路進(jìn)行檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，HW+TGF-β1組與TGF-β1組中Smad2的表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:富氫水通過(guò) Si