鋸緣青蟹Sox基因HMG-box的克隆及其表達分析.pdf

1、該文包括鋸緣青蟹Sox基因HMG-box的克隆和表達兩個部分.在第一部分中,參照人SRY基因HMG-box保守區(qū)的序列設計一對兼并引物,采用PCR技術以雌、雄鋸緣青蟹基因組DNA為模板進行PCR擴增,結果雌、雄個體均擴增出一條約216bp的目的片段,與陽性對照人SRY基因HMG-box保守區(qū)擴增片段大小一致,初步說明雌、雄鋸緣青蟹個體中均存在SRY基因的同源基因Sox.然后將PCR擴增產物克隆到pGEM-T載體上,輔以PCR-SSCP分

2、析技術篩選陽性克隆.最后挑取10個陽性克隆(4個來自雌蟹,6個來自雄蟹)測序,經(jīng)Blast搜索表明,雌性鋸緣青蟹的4個陽性克隆得到兩種不同序列:序列Ⅰ和序列Ⅱ,二者的比例為1:3,序列Ⅰ和序列Ⅱ片段長度均為213bp,編碼71個氨基酸.雄性鋸緣青蟹的6個陽性克隆只得到一種序列,與雌性鋸緣青蟹序列Ⅱ一致,為同一個Sox基因.Clustal W分析顯示,序列Ⅰ與序列Ⅱ之間核苷酸同源性為69%,氨基酸同源性為70%.依Sox基因家族7大亞族的

3、劃分,序列Ⅰ為Sox-B亞族成員之一,序列Ⅱ是Sox-C亞族成員之一.鋸緣青蟹雌、雄個體間Sox基因成員的差異,暗示Sox基因在鋸緣青蟹中可能有性別差異.在該論文的第二部分中,通過以鋸緣青蟹18S rRNA為內標的半定量RT-PCR,研究性成熟雌、雄鋸緣青蟹的性腺、肌肉、心臟和中腸腺四種組織Sox基因的表達.結果顯示,Sox基因在雌性的卵巢、肌肉組織、心臟和雄性的中腸腺中表達量較低,而在雄性的精巢中表達量較高,在雌性的中腸腺、雄性的肌肉