農桿菌介導的安祖花遺傳轉化研究.pdf

1、安祖花(Anthurium andreanum Lind.)作為世界第二大熱帶花卉，因其獨特的觀賞魅力倍受人們的青睞，但僅有的品種已不能滿足人們的需求。因此，許多研究者通過基因改造手段，對其進行花色改變，以提高商品價值。 本研究的主要目標是通過農桿菌介導的遺傳轉化方法導入類胡蘿卜素合成酶基因LyeB，使得葉片中積累大量的類胡蘿卜素，從而改變了安祖花的花色。本研究的主要研究結果如下： (1)優(yōu)化了安祖花的組織培養(yǎng)體系。首先

2、，對比了液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)這兩種培養(yǎng)方式對安祖花愈傷組織誘導率的影響。結果表明，液體培養(yǎng)要明顯優(yōu)于固體培養(yǎng)，并且液體培養(yǎng)基誘導的愈傷組織誘導率大約是固體培養(yǎng)的3～4倍。其次，通過正交實驗，分析NAA、活性碳、水解乳蛋白、香蕉泥四個因素對安祖花生根壯苗的影響，并得到最佳培養(yǎng)方案。當培養(yǎng)基中含NAA0.05mg/L、香蕉泥100g/L時，T×P生根良好，而ARZ在NAA0.05mg/L、水解乳蛋白400 g/L的培養(yǎng)基中生根最佳。

3、(2)建立了根癌農桿菌介導的安祖花遺傳轉化體系。以愈傷組織為轉化受體，詳細地探討了農桿菌濃度，浸染時間、共培養(yǎng)時間、AS濃度、超聲波處理對T-DNA轉化的影響，并優(yōu)化了轉化條件。結果表明，農桿菌濃度、浸染時間、共培養(yǎng)時間、AS濃度、超聲波處理都對農桿菌介導的遺傳轉化有一定的影響，它們在一定范圍內與抗性愈傷率呈正比，這些因素過高和過低都不利于農桿菌的轉化；將愈傷組織在OD600=0.6的菌液中浸染15min，然后超聲波處理20s，再在黑暗