尿液中快速甄別海洛因濫用者的SPE-LC-MS-MS檢測方法研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 1.建立尿液中嗎啡類藥物的固相萃取/液相色譜—串級質(zhì)譜(SPE/LC—MS/MS)方法; 2.建立快速甄別海洛因濫用者的LC—MS/MS定性方法; 3.通過尿液檢測研究服用含有嗎啡、可待因的鎮(zhèn)咳藥物、食用含罌粟殼作料的食物和海洛因濫用者尿液中嗎啡類藥物的代謝規(guī)律; 4.在嗎啡膠體金檢測陽性的情況下,尋找吸食嗎啡類毒品(海洛因、嗎啡、阿片)者、服用法律允許藥物(鎮(zhèn)咳藥、止痛藥)者及食用添加罌粟殼作料

2、的食物者尿液中嗎啡類代謝物之間的關(guān)系。 方法: 1.嗎啡類藥物固相萃取方法的研究:采用Waters OASIS(R)MCX 3cc(60mg)固相萃取柱進(jìn)行提取,分析了不同pH值條件、不同洗滌劑、不同洗脫溶劑對嗎啡類藥物固相萃取回收率的影響,優(yōu)化了自動固相萃取方法。 2.嗎啡類藥物L(fēng)C—MS/MS檢測方法條件優(yōu)化的研究:采用保留時間(Rt)和多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)方式來對尿液中嗎啡類藥物及其代謝物進(jìn)行定性定量分析。

3、 3.嗎啡類藥物代謝規(guī)律的研究。 3.1 實驗設(shè)計:健康志愿者26人,隨機(jī)分為三個實驗組: 3.1.1 第一組服用復(fù)方甘草片藥物組(10人),A:2人多次服用,每次3片,3次/日,連續(xù)服用三日;B:8人單次服藥,單次服用復(fù)方甘草片4片。 3.1.2 第二組服用可愈糖漿組(8人):單次服用10ml可愈糖漿。 3.1.3 第三組服用添加罌粟殼作料火鍋組(8人):食用添加罌粟殼作料的火鍋食物。

4、3.2 樣品采集與保存:志愿者服藥前半小時留取尿液作為空白對照,服藥后分別于0.5h,1.0h,1.5h,2.0h,2.5h,3.0h,3.5h,4.0h,6.0h…46.0h,48.0h留取尿液,并于-20℃條件保存。 3.3 樣品前處理及自動固相萃取(SPE)法:尿液樣品解凍,取3ml放入試管,4000r/min×3min離心,取上清液2ml轉(zhuǎn)移至另一試管中,加入pH4.0磷酸鹽緩沖液4ml備用,應(yīng)用建立的全自動固相萃取法提

5、取尿液。 3.4 LC—MS/MS方法檢測:采用保留時間和選擇2-3對離子定性,以1對響應(yīng)值相對較高的特征離子的峰面積與其溶液濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線,用外標(biāo)法進(jìn)行定量。 4.統(tǒng)計學(xué)方法:處理數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(—X±S)表示。 結(jié)果: 1.在磷酸鹽緩沖液pH4.0時,海洛因、O6—單乙酰基嗎啡(6—MAM)、可待因、嗎啡、3—β-d—葡萄糖醛酸嗎啡(M3G)、葡萄糖醛酸可待因(C

6、6G)、罌粟堿、蒂巴因、那可汀、納萃因的固相萃取回收率較高,平均回收率分別為66.52%,109.51%,99.18%,78.47%,101.92%,91.62%,88.88%,76.09%,88.35%,91.36%。 2.LC—MS/MS方法:生物樣本中嗎啡類藥物通過多離子監(jiān)測(MRM)方式可以得到較好的分離,靈敏度高。海洛因、6—MAM、可待因、嗎啡、M3G、C6G、罌粟堿、蒂巴因、那可汀及納萃因在0.01μg/ml~10

7、.0μg/ml范圍呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2分別為0.9997、0.9994、0.9992、0.9958、0.9998、0.9982、0.9999、0.9948、0.9999、0.9967,最低檢測限(LOD)分別為2pg、5pg、5pg、10pg、5pg、0.2pg、0.5pg、10pg、5pg、10pg。 3.服用鎮(zhèn)咳藥物者的尿液分析結(jié)果:服用含鴉片的鎮(zhèn)咳藥物如復(fù)方甘草片者尿液中檢測出嗎啡、可待因、M3G和C6G等嗎啡

8、類藥物成分,在0.5~3.0h濃度達(dá)到高峰,嗎啡/可待因峰面積比值(Mor/Cod):1.61±0.67≤Mor/Cod<3.07±1.85;服用含可待因的鎮(zhèn)咳藥物者尿液中檢測出嗎啡、可待因、M3G、C6G等嗎啡類藥物成分,在0.5~3h濃度達(dá)到高峰,0.09±0.07≤Mor/Cod<0.24±0.12。 4.食用添加罌粟殼作料火鍋者的尿液分析結(jié)果:尿液分析檢測出嗎啡、可待因、M3G和C6G等嗎啡類藥物成分,在0.5~3h濃度

9、達(dá)到高峰,2.48±2.08≤Mor/Cod<6.41±2.65,且有時可檢測出罌粟堿、那可汀、蒂巴因及納萃因等物質(zhì)。 5.海洛因濫用者尿液分析結(jié)果:6—MAM在一定時間內(nèi)可測出,有的還可以檢測到海洛因或乙??纱蛟挝镔|(zhì),162個尿樣中有90例檢出6—MAM,90例中除9例尿樣Mor/Cod比值小于1且9例均檢測出6—MAM外,其余均大于1。 結(jié)論: 1.本文建立的尿液中嗎啡類藥物的固相萃取/LC—MS/MS檢

10、測方法,回收率高,靈敏度高,可以用于快速檢測生物檢材中的嗎啡類藥物。 2.海洛因濫用者尿液分析:檢測到海洛因、乙??纱蛟挝镔|(zhì)或6—MAM任一成分可以確定吸食或注射海洛因;但是當(dāng)檢材中僅檢測到嗎啡、可待因、M3G及C6G時,需要考慮Mor/Cod比值。 3.海洛因濫用者和服用復(fù)方甘草片者尿液比較分析:尿液中均檢測出嗎啡、可待因及其葡萄糖醛酸化合物等成分,未檢測到6—MAM、海洛因或乙酰可待因時,尿液中Mor/Cod>1

11、仍無法確定是否吸食或注射過海洛因,此時通過陰離子檢測模式檢測尿液中有無甘草次酸,若檢測到甘草次酸,可以初步判定嫌疑人近期服用過復(fù)方甘草片。 4.海洛因濫用者和服用可愈糖漿者尿液比較分析:尿液中檢測出0.09+0.07≤Mor/Cod<0.24±0.12,可以判定嫌疑人服用過含可待因較多的鎮(zhèn)咳藥如可愈糖漿;Mor/Cod<1且檢測到6—MAM時,為海洛因濫用者。 5.海洛因濫用者和食用添加罌粟殼作料火鍋者尿液比較分析:食用

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