幽門螺桿菌經ROS通路激活NLRP3炎癥復合體誘導THP-1細胞分泌IL-1β和IL-18.pdf

1、目的:
　　NLRP3（NACTH domain-leucine-rich repeat,and PYD-containing protein，NLRP3）炎癥復合體能被多種激活劑所激活。活性氧(Reactive oxygen species，ROS)是激活NLRP3信號通路的信號之一。本實驗以THP-1（人單核細胞）來源的巨噬細胞為模型，觀察幽門螺桿菌（Helicobacter pylori, H. pylori）對NLRP3炎

2、癥復合體活化的影響及ROS在其中的作用。
　　方法:
　　將THP-1細胞與H. pylori SS1共孵育，按照不同MOI（感染復數）200:1、100:1、50:1、25:1，并于0h、3h、6h、12h、24h收集培養(yǎng)上清及細胞，ELISA檢測IL-1β和IL-18含量，FCM檢測 ROS的水平，Realtime-PCR檢測 NLRP3、caspase-1（cysteiny aspartate-specific pro

3、tease-1，caspase-1）mRNA水平，Western blot檢測 caspase-1的表達情況。采用 RNA干擾技術干擾 NLRP3基因表達，觀察NLRP3-siRNA對H. pylori誘導的IL-1β和IL-18分泌的影響。用25mM的ROS清除劑 N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）預處理 THP-1細胞30min，再按照MOI=100:1加入H. pylori SS1處理，觀察NAC預處理對

4、H. pylori誘導的NLRP3、caspase-1 mRNA表達以及IL-1β、IL-18分泌的影響。
　　結果:
　　(1) H. pylori能以時間依賴性和劑量依賴性方式誘導 THP-1細胞產生 IL-1β和IL-18；用MOI為100:1的H. pylori刺激THP-1巨噬細胞，IL-1β在6h達到最高，IL-18在12h達到最高（P<0.05）；當MOI為200:1時， IL-1β和IL-18產生水平減少。<

5、br>　　(2) FCM檢測結果顯示，H. pylori能以時間依賴性方式誘導 THP-1細胞產生ROS，其中于刺激6h達到高峰（p<0.01）；NAC預處理可明顯清除H. pylori處理后THP-1細胞ROS產生（p<0.05），于3h、6h、12h、24h ROS熒光值分別減少6.79％、33.63%、19.59%、14.68%。
　　(3) Realtime-PCR結果顯示， H. pylori刺激 THP-1細胞使細胞

6、NLRP3、caspase-1mRNA表達均有表達，NLRP3 mRNA于6h開始升高，12h達到高峰（p<0.05），caspase-1 mRNA于3h開始升高，12h達到高峰（p<0.01）；NAC預處理后NLRP3（p<0.05）、caspase-1（p<0.01）mRNA表達水平降低。
　　(4) Western blot結果顯示，H. pylori刺激的THP-1細胞后caspase-1p10（10KD）的蛋白含量升高，