稻瘟病菌中受MoSom1調(diào)控的部分基因的敲除及功能分析.pdf

1、先前的研究鑒定了一個(gè)作用于cAMP-PKA信號途徑下游，影響稻瘟病菌形態(tài)分化和致病性的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子:MoSom1。我們對突變體△mosom1進(jìn)行了表達(dá)譜測序分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MoSOM1缺失導(dǎo)致稻瘟病菌很多基因的表達(dá)發(fā)生明顯變化，本實(shí)驗(yàn)從中挑選4個(gè)表達(dá)差異顯著的基因進(jìn)行敲除及功能分析，以期發(fā)現(xiàn)與轉(zhuǎn)錄因子MoSom1相關(guān)的新的致病基因。同時(shí)，我們通過生物信息學(xué)分析，在稻瘟病菌基因組中選取2個(gè)含鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子和1個(gè)含ARID DNA-d

2、omain的假定蛋白一并進(jìn)行敲除和功能鑒定，以期發(fā)現(xiàn)新的調(diào)控稻瘟病菌重要生物學(xué)功能的基因。但通過對這些基因進(jìn)行敲除實(shí)驗(yàn)及表型分析，我們發(fā)現(xiàn)這些基因的缺失不影響稻瘟病菌形態(tài)發(fā)育和致病性。
　　 我們的另一個(gè)研究發(fā)現(xiàn)兩個(gè)編碼亞甲基四氫葉酸還原酶MTHFR的同源基因MoMET13和MoMET12，已有的研究結(jié)果表明這兩個(gè)基因參與甲硫氨酸代謝途徑的葉酸循環(huán)，MoMET13基因缺失后稻瘟病菌不能在甲硫氨酸營養(yǎng)缺陷條件下生長并喪失對寄主水稻

3、的致病性。為了研究這兩個(gè)基因的缺失對稻瘟病菌甲硫氨酸途徑中其它相關(guān)基因的影響，本研究通過qRT-PCR對該途徑中的相關(guān)基因在突變體和野生型菌株中的表達(dá)進(jìn)行了差異分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些基因的表達(dá)明顯受到Mo MET13和MoMET12基因缺失的影響。另為了探究亞甲基四氫葉酸還原酶MoMet13在真菌中是否具有功能保守性，我們用赤霉(F.graminearum)中與MoMET13同源的基因FGSG_09572互補(bǔ)稻瘟病菌MoMET13基因的缺失