腦膜炎奈瑟菌莢膜轉(zhuǎn)換、分子伴侶功能與抗逆性的研究以及細(xì)菌基因無(wú)痕敲除方法的建立.pdf

1、2013年，浙江省疾控中心報(bào)道了一起由X血清群ST-7分離株引起的侵襲性腦膜炎病例。然而，在中國(guó)超過(guò)50％的侵襲性腦膜炎病是由腦膜炎奈瑟菌A血清群引起;而且，ST-7腦膜炎奈瑟菌株通常屬于A血清群。因此，我們推測(cè)該次感染是由于發(fā)生了莢膜轉(zhuǎn)換。
　　為了確定該株腦膜炎奈瑟菌是否來(lái)源于血清群X菌和ST-7血清群A的莢膜轉(zhuǎn)換，我們對(duì)X血清群ST-7株菌和3株A血清群菌ST-7的莢膜基因座以及它們的側(cè)翼區(qū)域進(jìn)行了測(cè)序。通過(guò)生物信息學(xué)方法分

2、析了莢膜轉(zhuǎn)換的基因重組位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)該ST-7株替換了來(lái)源于X血清群galE至ctrC之間大約8450bp的DNA片段。同時(shí)我們通過(guò)莢膜重組體外實(shí)驗(yàn)測(cè)定了莢膜轉(zhuǎn)換頻率和涉及的重組基因片段的大小，結(jié)果發(fā)現(xiàn)莢膜重組的頻率大約是6.3×10-6每細(xì)菌每微克DNA，莢膜重組所涉及到的重組基因片段大小約為8.1-9.6kb。
　　腦膜炎奈瑟菌被中性粒細(xì)胞吞噬后，中性粒細(xì)胞可以產(chǎn)生大量的活性氧族(reactive oxygen species，R

3、OS)以影響細(xì)菌生存，同時(shí)胞內(nèi)低pH環(huán)境也不利于細(xì)菌的生長(zhǎng)，但是有研究證明該菌在中性粒細(xì)胞中數(shù)量呈現(xiàn)先降低后升高的狀態(tài)。分子伴侶是一類(lèi)可以協(xié)助細(xì)胞內(nèi)其他蛋白質(zhì)正確折疊的蛋白質(zhì)，因此，我們推測(cè)分子伴侶對(duì)于被ROS和低pH損傷的腦膜炎奈瑟菌蛋白質(zhì)有修復(fù)作用，從而有利于細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)的存活。我們的實(shí)驗(yàn)表明相比野生型腦膜炎奈瑟菌，其分子伴侶突變體對(duì)于熱、百草枯、過(guò)氧化氫、次氯酸和酸性環(huán)境更為敏感，暗示分子伴侶對(duì)于腦膜炎奈瑟菌的致病性有重要影響。<