ABCA1基因啟動(dòng)子區(qū)突變鑒定及其對(duì)豬血漿高密度脂蛋白水平的影響.pdf

1、高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）在調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)血漿膽固醇水平的動(dòng)態(tài)平衡起到了關(guān)鍵性的作用。血漿中的膽固醇過量的累積會(huì)導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。大量的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)了ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1，ABCA1)介導(dǎo)了血漿HDL生成，將體內(nèi)過量的膽固醇和各類脂蛋白轉(zhuǎn)化為磷脂從而形成HDL。血漿中高密度脂蛋白水平越高，一些心血管疾病的發(fā)生概率就越低。

2、在大量的人類疾病和動(dòng)物模型的研究中已經(jīng)證實(shí)了提高肝臟ABCA1的活性能夠增加血漿高密度脂蛋白的水平。本實(shí)驗(yàn)以ABCA1作為候選基因，挖掘ABCA1基因啟動(dòng)子區(qū)域的單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism，SNP)位點(diǎn)，分析其與ABCA1基因表達(dá)水平及血漿HDL水平的關(guān)系。
　　本實(shí)驗(yàn)取高低組HDL樣品各30個(gè)進(jìn)行DNA混池測(cè)序，將ABCA1啟動(dòng)子全部區(qū)域測(cè)序，進(jìn)行高低組之間比較。得到了在HDL高

3、組和低組中等位基因分布模式存在差異的兩個(gè)SNP位點(diǎn)，分別為c.-608A＞G和c.-418T＞A。采用等位基因特異性PCR技術(shù)對(duì)這兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，通過對(duì)526個(gè)四元雜交豬的大群分型驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)位點(diǎn)是完全連鎖的，并且只形成了G-A和A-T兩種單倍型。結(jié)果顯示，G-A/G-A基因型比A-T/A-T基因型擁有更高的血漿HDL水平。對(duì)兩組各12個(gè)不同基因型個(gè)體的ABCA1表達(dá)水平分析，結(jié)果表明G-A/G-A基因型表達(dá)水平顯著高于A-T/

4、A-T基因型(p＜0.05)。
　　通過雙熒光素酶活性報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)兩種單倍型啟動(dòng)子的活性，結(jié)果表明G-A啟動(dòng)子比A-T啟動(dòng)子具有更高的活性，二者差異顯著(P＜0.05)。點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)顯示，c.-418T＞A是引起ABCA1轉(zhuǎn)錄活性發(fā)生變化的關(guān)鍵位點(diǎn)，堿基T突變?yōu)锳能夠引起ABCA1基因啟動(dòng)子活性升高，并且促進(jìn)了ABCA1基因表達(dá)水平升高，從而提高了血漿HDL水平。
　　本研究通過鑒定ABCA1基因啟動(dòng)子區(qū)與血漿HDL水平相關(guān)的