補(bǔ)腎方劑誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖分化的理論和實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的:本研究在中醫(yī)學(xué)“腎藏精”理論指導(dǎo)下,結(jié)合現(xiàn)代干細(xì)胞生物學(xué)研究成果,分析中醫(yī)學(xué)“先天之精”與干細(xì)胞的相關(guān)性,以及腎精與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞之間的內(nèi)在聯(lián)系:觀察補(bǔ)。腎方劑對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、分化的影響,探討其調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、分化的分子機(jī)制,以期為探索“腎藏精”理論的科學(xué)內(nèi)涵以及補(bǔ)腎方劑的臨床應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù),為中醫(yī)藥在干細(xì)胞領(lǐng)域的深入研究提供新的思路。
　　 研究方法:
　　 1.理論研究:通過系統(tǒng)

2、整理與總結(jié)中醫(yī)學(xué)“精”、“先天之精”、“腎精”等理論以及現(xiàn)代干細(xì)胞研究的成果,采用比較分析的方法,對(duì)干細(xì)胞的“先天之精”屬性以及“腎精”與間充質(zhì)干細(xì)胞的相關(guān)性進(jìn)行全面的分析,從干細(xì)胞層面探討補(bǔ)腎法治療腎精虧虛相關(guān)疾病的可能機(jī)理。
　　 2.實(shí)驗(yàn)研究:采用全骨髓貼壁法分離純化SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞周期、細(xì)胞表面標(biāo)示檢測(cè)相結(jié)合的方法,對(duì)培養(yǎng)的rBMSCs進(jìn)鑒定;采用MTT法分別檢測(cè)六味地黃丸、腎

3、氣丸、左歸丸、右歸丸—四首經(jīng)典補(bǔ)腎方劑水提液對(duì)體外培養(yǎng)的rBMSCs細(xì)胞毒性及增殖的影響;采用ALP活性檢測(cè)補(bǔ)腎方劑水提液對(duì)體外培養(yǎng)的rBMSCs骨向分化的影響;采用Westernbloting檢測(cè)經(jīng)補(bǔ)腎方劑水提液干預(yù)后體外培養(yǎng)的rBMSCsBMP-2蛋白的表達(dá);采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)經(jīng)補(bǔ)腎方劑水提液干預(yù)后體外培養(yǎng)的rBMSCsRunx2mRNA的表達(dá)。
　　 研究結(jié)論:
　　 1.理論研究:中醫(yī)學(xué)理論之“先天之精”

4、學(xué)說與干細(xì)胞之間無論來源還是功能均具有極高的相似性,而“腎精”與間充質(zhì)干細(xì)胞的關(guān)系尤為密切,間充質(zhì)干細(xì)胞可以看作“腎精”功能體現(xiàn)的主要物質(zhì)基礎(chǔ),補(bǔ)腎方劑治療腎精虧虛的效應(yīng)機(jī)理可能與調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、分化等生物學(xué)行為有關(guān)。
　　 2.實(shí)驗(yàn)研究:
　　 (1)全骨髓貼壁法分離的rBMSCs符合BMSCs的生物特性,建立的rBMSCs體外培養(yǎng)體系可滿足實(shí)驗(yàn)要求。
　　 (2)四首經(jīng)典補(bǔ)腎方劑(六味地黃丸、腎氣丸、左

5、歸丸、右歸丸)水提液均可促進(jìn)體外培養(yǎng)的rBMSCs增殖,且補(bǔ)。腎陰(滋腎益精)方劑的作用強(qiáng)于補(bǔ)腎陽(yáng)(溫腎益精)方劑。
　　 (3)四首經(jīng)典補(bǔ)腎方劑水提液均可促進(jìn)體外培養(yǎng)的rBMSCs向成骨細(xì)胞分化,且補(bǔ)腎陽(yáng)(溫腎益精)方劑的作用強(qiáng)于補(bǔ)腎陰(滋腎益精)方劑。
　　 (4)四首經(jīng)典補(bǔ)腎方劑水提液均可上調(diào)體外培養(yǎng)的rBMSCs中BMP-2的水平以及Runx2mRNA的表達(dá),而且補(bǔ)腎陽(yáng)(溫腎益精)方劑的作用強(qiáng)于補(bǔ)腎陰(滋腎益精)