產(chǎn)單核細胞李斯特菌hly和actA基因的原核表達及其產(chǎn)物的單克隆抗體研制.pdf

1、揚州大學碩士學位論文產(chǎn)單核細胞李斯特菌hly和actA基因的原核表達及其產(chǎn)物的單克隆抗體研制姓名：董慧申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導教師：焦新安20060501赫弼走學嬡士學篷速文二、LLO單克隆抗體的制蠢與鑒定誘導鶯組大腸桿諮BL21(pGEX6p1hly)，對全菌蛋宦避行SDSPAGE電泳，切割表達GSTLLO的目的條帶，研磨粉碎后免疫BALB／c小鼠，1001xg／P，腹腔注瓣，霹舔憊兩囂，共免疫3次。融臺囊謄3天綾縫純雖鑫G

2、s謄毛己0露靜躲熱強兔痰，7／ag／只。按常規(guī)稷序融合，純化蛋白GSTLLO、GST作為梭測抗原；間接ELISA方法篩選陽性克隆，軟得3株穩(wěn)定分泌LLOMcAb的細胞株，命名為386、4D1、5D10，腹承散價分鄹舞2105、210’、l105。McAb弱抗體疆類溺定埒為IgGl。溶血抑制試驗表明3株單抗均能抑制LLO介母的溶解小鼠紅細胞的能力。DotELISA試驗表明：3攮零撬其與表達GS孓LL0載重組大嬲耪蘸以及￡掇分離株反應，與其

3、它菌株不反應。Westernblot試驗中，3株革抗均能與融合蛋白0STLLO發(fā)生反應，土；現(xiàn)特異性條帶，而與純化蛋白GST不反應。LLO特異性單究隆抗體瓣成功磣稍，為研究LLO竣及蕊醇激活縋緇麓溶素家族葵經(jīng)藏爨的生物舉特性、控制Lm的致病性，以及建立快速檢測Lm的方法奠定了基礎。三、AetA蛋自擎憲隆抗體酶翻備與簽定應用淋巴細胞雜突瘤技術，以重組菌BL21(DE3)(pETactA)表達產(chǎn)物HisActA臻鑫免疫8羯耱BALB／e小鼓

4、，竣駐注瓣，lG0耀，只，善受露，菝擐與等量弗囂寵全佐劑混合乳化；二免、三兔時抗原與等量不完全弗氏佐劑混合乳化，間隔為兩髑；尾靜脈加強免疫不加佐劑的抗原，100tgJ只，3d后，取免疫鼠膊細胞和骨髓瘸sp2／o—Ag14細胞遴行融合。筑純酶GSTActA俸為檢測藏原，嗣聞接ELISA方法篩選陽性克隆，獲得4株穩(wěn)定分泌ActAMcAb的細胞株，命名為1A5、2A2、3G1l、6F5，黢承匏皴徐蘞次必lt0’、5104、lxl05、5l礦。

5、滁2A2McAb濺類為IgM外，其余均為IgGl。Dot—ELISA試驗表明，4株革抗只與表達HisActA及GSTActA的重組大腸桿菌反應，與其它菌株不反應。Westernblot試驗顯示4糠莘蕕筠麓與敲合鬣鑫His—ActA及GSTActA發(fā)篁三反應，窶纜特異鏈條繁。MeAb1A5、2A2、3G11、6F5是針對ActA的特異性單克隆抗體，它們在研究ActA的生物學功能、Lm茲致瘸性以及撼示細菌艦動蛋白運動機制等方題具有重鬟鵲應用