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1、目的:丹參是中醫(yī)臨床常用的活血化瘀藥,具有活血通經(jīng)、涼血消癰、除煩安神等功效,其活性成分主要包括水溶性和脂溶性?xún)纱箢?lèi),水溶性有效成分為酚酸類(lèi),脂溶性有效成分為丹參酮類(lèi)。大量臨床資料表明,瘀血內(nèi)阻為非酒精性脂肪肝(NAFLD)的重要發(fā)病機(jī)制,丹參為中醫(yī)臨床治療脂肪肝過(guò)程中比較常用的活血化瘀藥。為了進(jìn)一步探討其不同組分防治NAFLD的作用機(jī)制,參照相關(guān)文獻(xiàn)運(yùn)用喂飼高脂飼料法復(fù)制NAFLD大鼠模型,同時(shí)施加藥物干預(yù),觀察了丹參總酚酸和丹參總酮
2、對(duì)NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝、肝功能以及肝組織PPARαmRNA表達(dá)的影響,探討了其促進(jìn)脂質(zhì)代謝、抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷、保護(hù)肝功能和增強(qiáng)PPARαmRNA表達(dá)的作用機(jī)制,并運(yùn)用光鏡觀察了其對(duì)肝組織形態(tài)學(xué)的影響。
方法:選用SD大鼠50只,體重180~200g,雄性。大鼠自由飲水進(jìn)食,飼養(yǎng)于18℃~22℃明暗各12小時(shí)的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。正常喂養(yǎng)1周后,按體重分層隨機(jī)分為5組,每組10只,即:正常對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)正常組,normal co
3、ntrol group,N)、模型對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)模型組,model group,M)、丹參總酮組(簡(jiǎn)稱(chēng)總酮組,Zong-tong group,T)、丹參總酚酸組(簡(jiǎn)稱(chēng)總酚酸組,Zong-fen-suan group,F(xiàn))、陽(yáng)性藥(東寶肝泰)對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組Dong-Bao-Gan-Tai control group,D)。除正常組喂飼普通飼料外,其余各組均喂飼高脂飼料,共造模8周。造模的同時(shí),各用藥組灌服治療藥或?qū)φ账?,正常組與模型組灌
4、服等量生理鹽水,每天上午灌胃1次。各組1次/d灌胃,每次用藥體積均按1ml/100g計(jì)算。于最后1次給藥后禁食12h,麻醉狀態(tài)下股動(dòng)脈取血,將血樣低溫離心,分離血清,密封,-20℃冷貯備用。于肝臟最大葉距邊緣0.5cm處取少許肝組織,用液氮冷凍以備RT-PCR檢測(cè)PPARαmRAN,并取相同部位0.5×0.5×0.5cm3大小的肝組織,置于4%多聚甲醛液中固定,石蠟包埋,切片,HE染色,以備光鏡觀察。然后取適量肝組織冷凍以備制作肝組織勻
5、漿,檢測(cè)TC、TG、FFA、SOD、MDA的含量或活性。
結(jié)果:
1各組大鼠血清TG、TC含量的變化
與正常組比較,模型組大鼠血清TG、TC明顯升高(p<0.01),顯示NAFLD大鼠存在著明顯的脂質(zhì)代謝紊亂。給藥后,各用藥組均能降低模型大鼠血清 TG、TC的含量,(p<0.01)。其中,總酚酸組TC、TG的含量低于對(duì)照組和總酮組(p<0.05或p<0.01)。
2各組大鼠血清AST、ALT活性的
6、變化
與正常組比較,模型組大鼠血清AST、ALT活性明顯增高(p<0.01)。給藥后,各治療組大鼠血清的AST、ALT活性顯著降低(p<0.01)。其中,總酮組和總酚酸組ALT和AST的活性均低于對(duì)照組(p<0.05或p<0.01),總酚酸組ALT的活性低于總酮組(p<0.05)。
3各組大鼠肝組織中TG、TC、FFA含量的變化
與正常組比較,模型組大鼠肝組織中TG、TC的含量明顯升高(p<0.01),顯示
7、NAFLD大鼠存在著明顯的肝內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂。各給藥組均能降低TC、TG含量(p<0.01),其中,總酚酸組TC、TG的含量低于對(duì)照組和總酮組(p<0.05);總酮組和總酚酸組FFA的含量均低于對(duì)照組(p<0.05)。
4各組大鼠肝組織中MDA含量和SOD活性的變化
與正常組比較,模型組大鼠肝組織中MDA的含量明顯升高(p<0.01),SOD活性明顯降低(p<0.01),顯示NAFLD大鼠存在著明顯的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。各
8、給藥組均能降低。MDA含量(p<0.01),增加SOD活性(P<0.01)。其中,總酚酸組MDA的含量低于對(duì)照組和總酮組(p<0.05);SOD活性高于對(duì)照組和總酮組(P<0.05)。詳見(jiàn)Table2。
5各組大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)的變化
光鏡下可見(jiàn):正常組大鼠肝組織的結(jié)構(gòu)完整、清晰,肝小葉的結(jié)構(gòu)正常,中央靜脈大而壁薄,肝細(xì)胞排列成肝索狀,在中央靜脈周?chē)史派錉罘植?,?xì)胞呈多邊形。模型組大鼠肝細(xì)胞呈現(xiàn)中至重度脂肪變性,伴
9、細(xì)胞水腫,少量的肝細(xì)胞壞死,但未見(jiàn)明顯的纖維化改變。各治療組大鼠的肝細(xì)胞脂肪變均呈現(xiàn)不同程度的改善趨勢(shì),以總酚酸組改善程度最為明顯。
6各組大鼠肝臟PPARαmRNA表達(dá)的變化
RT-PCR后,瓊脂糖凝膠電泳,在444bp、587bp處分別顯示出PPARα和β-actin電泳帶,與預(yù)期結(jié)果一致。模型組大鼠肝組織PPARαmRNA的表達(dá)明顯低于正常組(P<0.01)。給藥后,各用藥組PPARαmRNA的表達(dá)均高于模型組
10、,(P<0.01或P<0.05),且總酚酸和總酮組PPARαmRNA的表達(dá)高于對(duì)照組(P<0.05),而總酚酸和總酮組之間經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
結(jié)論:
1丹參總酚酸和丹參總酮均能顯著降低NAFLD大鼠血清和肝組織內(nèi)異常升高的TC、TG、FFA的含量,抑制血清內(nèi)ALT和AST活性的異常升高,呈現(xiàn)出良好的調(diào)脂護(hù)肝作用。
2丹參總酚酸和丹參總酮均可明顯改善NAFLD大鼠肝組織的病變程度,表現(xiàn)
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