野生漿果花色苷提取純化、結(jié)構(gòu)鑒定及體外抗氧化活性分析.pdf

1、花色苷(Anthocyanin)是一類廣泛存在于植物的花、果實(shí)和葉中的水溶性天然色素,屬于多酚類化合物。天然無害的食用色素開發(fā)利用成了植物化學(xué)和食品科學(xué)研究中近年來引人矚目的課題?；ㄉ粘俗鳛槭秤蒙赝?它還對(duì)人類的腫瘤、衰老、心血管病等疾病的預(yù)防與治療有重要的意義。本研究以三種東北野生漿果(篤斯越橘、紅樹莓、黑加侖)為研究對(duì)象,進(jìn)行了花色苷的提取、純化、結(jié)構(gòu)鑒定及體外抗氧化活性的研究和探討,為花色苷的工業(yè)化生產(chǎn)提供了理論依據(jù)。

2、>　　 采用溶劑浸提法進(jìn)行花色苷的提取。最佳提取工藝分別為:篤斯越橘:提取溶劑乙醇:TFA:水=49.5:0.5:50(v/v/v),料液比為10:1,在4000rpm的條件下離心提取15min。紅樹莓:提取溶劑乙醇:TFA:水=49.5:0.5:50(v/v/v),pH值為2,料液比為33:1,在70℃水浴加熱條件下提取60min。黑加侖果渣:提取溶劑75％乙醇溶液,pH值為2,料液比為1:50,在50℃水浴中攪拌浸提1h。采用pH

3、示差法測定三種野生漿果花色苷粗提物中的花色苷含量,篤斯越橘花色苷含量等量于90.6±1.1mg/100g篤斯越橘果鮮重；紅樹莓花色苷含量等量于76.09±0.8mg/100g紅樹莓果鮮重；黑加侖果渣花色苷含量等量于217.81±8.56mg/100g黑加侖果鮮重。
　　 采用柱層析法對(duì)花色苷提取物進(jìn)行分離純化,對(duì)純化條件進(jìn)行了探討,確定X-5、AB-8和X-5大孔樹脂分別為純化篤斯越橘、紅樹莓和黑加侖花色苷的最佳柱填料。最佳純化

4、條件分別為:篤斯越橘:洗脫劑乙醇濃度為70％,pH為1,吸附及解吸流速為1mL/min,洗脫體積為6倍柱體積,經(jīng)過樹脂純化后的篤斯越橘花色苷的色價(jià)是純化前的21.2倍。紅樹莓:最佳樹脂為AB-8大孔樹脂,洗脫劑乙醇濃度為60％,pH為2,吸附及解吸流速為2mL/min,洗脫劑體積為6倍柱體積,經(jīng)過樹脂純化后的紅樹莓花色苷的色價(jià)是純化前的17.7倍。黑加侖果渣:最佳樹脂為X-5大孔樹脂,洗脫劑乙醇濃度為70％,pH為2,吸附及解吸流速為1

5、mL/min,洗脫劑體積為5倍柱體積,經(jīng)過樹脂純化后的黑加侖花色苷的色價(jià)是純化前的20.9倍。
　　 經(jīng)純化后的花色苷真空凍干成粉末,利用反相HPLC對(duì)花色苷進(jìn)行分離。參照花色苷的分子離子與碎片離子峰,并結(jié)合以保留時(shí)間、出峰順序和質(zhì)譜裂解特征對(duì)花色苷的成分進(jìn)行鑒定并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。篤斯越橘花色苷通過HPLC-MS分析鑒定出11種花色苷和2種非花色苷物質(zhì)。其中以錦葵-3-葡萄糖苷和飛燕草-3-葡萄糖昔含量最高。兩種非花色苷物質(zhì)分

6、別為槲皮素-3-蕓香糖苷和槲皮素。紅樹莓花色苷通過HPLC-MS分析鑒定出9種花色苷,其中,以矢車菊-3-葡萄糖苷和矢車菊含量最高。黑加侖果渣花色苷通過HPLC-MS分析鑒定出10種花色苷,其中,以錦葵-3-葡萄糖苷含量最高。
　　 對(duì)篤斯越橘、紅樹莓及黑加侖花色苷的體外抗氧化活性分析分別采用DPPH法,清除羥基自由基,清除超氧陰離子自由基,抗脂質(zhì)過氧化能力及還原能力測定五種體外抗氧化測定方法進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。
　　 篤斯越

7、橘、紅樹莓、黑加侖花色苷的體外抗氧化活性研究中,將三種花色苷溶液與Vc溶液進(jìn)行了比較。研究結(jié)果表明,三種花色苷可以有效清除DPPH自由基、羥基自由基、超氧自由基；都具有還原力；可以有效地抑制脂質(zhì)過氧化。從篤斯越橘、紅樹莓和黑加侖三種漿果中提取的花色苷的抗氧化能力和其花色苷的濃度之間存在著明顯的量效關(guān)系,且通過對(duì)抗氧化方法之間相關(guān)性的分析,得出相比于評(píng)價(jià)抗氧化能力的其它方法,抗脂質(zhì)過氧化、清除羥基自由基和清除超氧陰離子自由基是更適合用于花