芝麻菜苷及其水解產(chǎn)物Erucin的分離純化及體外抗氧化研究.pdf

1、十字花科植物中含有大量的植物化學成分，其中的硫代葡萄糖苷（簡稱硫苷）是植物生長過程中產(chǎn)生的含硫的次級代謝產(chǎn)物。經(jīng)流行病學證明，硫苷的水解產(chǎn)物異硫氰酸酯是目前公認的具有防癌和抗癌活性的天然產(chǎn)物之一。人們發(fā)現(xiàn)異硫氰酸酯不僅能夠抑制多種癌細胞的形成，而且還可以提高機體組織中谷胱甘肽的水平，能夠顯著增強Ⅱ型解毒酶的活性。本文以芝麻菜種子為原料，研究并開發(fā)了芝麻菜苷(glucoerucin)和異硫氰酸酯(Erucin)的分離純化條件;研究了雙氧水

2、氧化芝麻菜苷耦合黑芥子酶制備萊菔硫烷的工藝條件;利用DPPH自由基、OH自由基和還原力的方法，對比分析glucoerucin(GER)，glucoraphanin(GRA)，glucoraphenin(GRE)，erucin(ERN)，sulforaphane(SFN)，GRE-ITC的體外抗氧化活性。
　　 優(yōu)化了利用大孔樹脂和制備色譜分離純化芝麻菜苷及Erucin的條件。通過靜態(tài)樹脂的篩選，確定了分離芝麻菜苷的樹脂為大孔陰離

3、子交換樹脂D261。洗脫劑為100mM/L的KC1溶液。利用制備型色譜純化芝麻菜苷時，流動相為2％甲醇溶液，采用等度洗脫模式，流速為8ml/min，進樣量100mg。利用50mM/LpH=7的磷酸氫二鉀-磷酸二氫鉀緩沖液水解芝麻菜種子2h，得到的水解液經(jīng)離心過濾后利用大孔樹脂SP850吸附，吸附流速為8ml/min，去離子水沖洗完雜質(zhì)后，采用80％的乙醇溶液洗脫Erucin，洗脫流速為10ml/min。利用制備色譜進一步純化Erucin

4、，流動相為25％的甲醇溶液，檢測波長為254nm，采用等度洗脫，流動相流速為8ml/min。
　　 研究了雙氧水氧化芝麻菜苷耦合黑芥子酶制備萊菔硫烷的工藝條件。先將芝麻菜苷氧化成GRA，氧化劑為雙氧水。氧化反應(yīng)的條件為:室溫下，等濃度的芝麻菜苷與雙氧水反應(yīng)體積比為1∶7，避光下反應(yīng)3h后，芝麻菜苷轉(zhuǎn)化成GRA。從西蘭花種子中提取黑芥子酶，利用黑芥子酶將GRA水解為萊菔硫烷。實驗同時將氧化得到的GRA加入到西蘭花種子水解液中，萊菔

5、硫烷生成量明顯增加。
　　 研究硫苷及異硫氰酸酯抗氧化活性時，清除DPPH自由基的能力與硫苷及異硫氰酸酯的濃度成正比。其清除率順序由大到小為:GER＞GRE＞ERN＞GRE-ITC＞GRA＞SFN。芝麻菜苷的清除DPPH自由基的效果最好，二級反應(yīng)速率常數(shù)為9.04M-1s-1，EC50為2.5mM/L。硫苷及異硫氰酸酯能夠清除OH自由基，清除效果與反應(yīng)的時間成正比。以α-tocopherol為對照，實驗對硫苷及異硫氰酸酯進行了還