中藥川木通的品種系統(tǒng)研究、分子鑒定及小木通HMG CoA還原酶的克隆表達(dá)研究.pdf

1、成都中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文中藥川木通的品種系統(tǒng)研究、分子鑒定及小木通HMGCoA還原酶的克隆表達(dá)研究姓名：國錦琳申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：中藥學(xué)指導(dǎo)教師：萬德光200705成都中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文2代才形成這一名稱。其基源植物從清代開始主要就是毛茛科植物，與今天的川木通一致。四川地區(qū)一直以來就是川木通的主產(chǎn)區(qū)，清代四川地方本草《天寶本草》記載的“四朵梅”證實了四川是川木通道地產(chǎn)區(qū)的說法。歷代本草記載療效與現(xiàn)今應(yīng)用基本一致?，F(xiàn)今典籍收載的

2、川木通基源植物多達(dá)30多種，常見的主要有10余種。2、川木通資源植物（四川）及商品藥材調(diào)查研究對四川地區(qū)川木通的植物資源進(jìn)行了標(biāo)本查證與實地調(diào)查；對道地產(chǎn)區(qū)四川進(jìn)行了有效的區(qū)劃，并提出可行的規(guī)劃種植方案。同時對國內(nèi)使用川木通的主要地區(qū)進(jìn)行了商品調(diào)查，經(jīng)過綜合分析與鑒定，發(fā)現(xiàn)目前四川產(chǎn)川木通的野生種質(zhì)資源經(jīng)過多年的采伐，破壞嚴(yán)重。通過徒手切片、石蠟切片、粉末、解離組織的觀察比較，發(fā)現(xiàn)不同基源的川木通藥材和原植物的差異，分別編制了鑒定檢索表

3、，為該種藥材的合理準(zhǔn)確利用提供一定的科學(xué)依據(jù)。對國內(nèi)主要藥材市場（10個）初步調(diào)查發(fā)現(xiàn)目前川木通商品主流品種為藥典收載品種小木通（Clematis.armiiFranch.）但在商品藥材中還混雜有較大量的粗齒鐵線蓮（C.argentilucidaW.T.Wang），藥典收載品種繡球藤（C.montanaBuch.Ham.）在此次商品藥材調(diào)查中未見。3、川木通分子鑒定本課題選擇了RAPD方法進(jìn)行分子鑒定，首次通過正交分析方法確定了RAPD

4、方法PCR反應(yīng)的條件。采用正交設(shè)計L16(45)在四個水平上進(jìn)行試驗，用統(tǒng)計軟件MINITAB進(jìn)行分析，得到川木通RAPDPCR反應(yīng)各因素的最佳水平。選擇100對隨機引物進(jìn)行引物篩選，選擇其中多態(tài)性豐富的5對作為RAPD引物進(jìn)行川木通10個種的擴增分析，最終得到C5、C13和I18為陽性SCAR標(biāo)記，可以進(jìn)行川木通原植物與藥材的分子鑒定引物，其中C5和I18可以鑒定藥典品種小木通與繡球藤這兩種，C13可以鑒定上述兩種藥典品種和商品主流品