探討木酚素-腸內(nèi)酯激活GPER通路對(duì)前列增生的抑制作用.pdf

1、目的:通過(guò)觀察木酚素體內(nèi)抑制大鼠前列腺增生(BPH)的效果，體外探討木酚素代謝產(chǎn)物腸內(nèi)酯是否激活G蛋白偶聯(lián)的雌激素受體(G Protein-Coupled Estrogen Receptor1/GPER)信號(hào)通路來(lái)抑制大鼠前列腺增生。
　　方法:32只雄性Wistar大鼠（約200g)隨機(jī)分為開(kāi)環(huán)異落葉松樹(shù)脂酚二葡萄糖苷（Secoisolariciresinol Diglycoside，SDG）治療組、非那雄胺（Finasteri

2、de）治療組、模型組與生理鹽水空白對(duì)照組，每組8只大鼠；每日皮下注射丙酸睪酮（Testosterone Propionate，TP)（5mg/kg/d），連續(xù)注射28天建立TP誘導(dǎo)的大鼠前列腺增生模型。SDG治療劑量40mg/Kg/d，非那雄胺治療量0.1mg/Kg/d，均經(jīng)灌胃給予，治療時(shí)間4周；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)獲取大鼠前列腺，計(jì)算前列腺指數(shù)，前列腺組織HE染色觀察前列腺組織形態(tài)，免疫熒光檢測(cè)GPER的表達(dá)情況。體外培養(yǎng)人前列腺基質(zhì)細(xì)胞（W

3、PMY-1），SDG體內(nèi)代謝產(chǎn)物腸內(nèi)酯（Enterolactone,ENL）按1μΜ、5μΜ、10μΜ、20μΜ濃度分別處理24h后,采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況；分別用20μΜ腸內(nèi)酯和GPER特異性激動(dòng)劑G-1處理人前列腺基質(zhì)細(xì)胞24h后進(jìn)行細(xì)胞周期測(cè)定，并且采用蛋白印跡檢測(cè)GPER、p-ERK、P53、P21、CyclinD1的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　?、袤w內(nèi)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，SDG治療組大鼠前列腺指數(shù)明顯減少，與

4、非那雄胺組前列腺指數(shù)比較無(wú)差異；前列腺HE染色顯示，SDG組前列腺上皮和基質(zhì)細(xì)胞的假?gòu)?fù)層的厚度減少，腺體形態(tài)大致恢復(fù)，免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)SDG治療組組前列腺細(xì)胞膜上GPER受體水平顯著增加。
　?、隗w外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，腸內(nèi)酯組的人前列腺基質(zhì)細(xì)胞系WPMY-1細(xì)胞增殖受到抑制，細(xì)胞周期阻滯于G1期，Western檢測(cè)發(fā)現(xiàn)與抑制細(xì)胞增殖相關(guān)的基因p-ERK、P53、P21基因表達(dá)增加，而細(xì)胞周期蛋白CyclinD1表達(dá)降低。