WD患者ATP7B基因突變熱點及其與臨床表型相關性研究.pdf

1、課題背景:
　　 肝豆狀核變性（Hepatolenticular degeneration, HLD）又名Wilson 病（Wilson’ sdisease, WD），是一種常染色體隱性遺傳性銅代謝障礙性疾病。臨床主要表現為血清銅藍蛋白減低、肝硬化、進行性加重的錐體外系癥狀、角膜色素環(huán)、精神癥狀等。
　　 WD基因存在高度的遺傳異質性，且突變熱區(qū)和高頻突變位點具有區(qū)域、種族差異性。
　　 目前，關于WD患者基因型

2、和臨床表型之間的關系存在很大的爭議。本研究采用變性高效液相色譜法（denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC）技術對WD患者進行基因檢測，并探討基因型和表型之間的關系。
　　 目的:
　　 采用快速、高效的DHPLC對WD患者進行基因檢測，尋找中國人WD患者新的基因突變熱區(qū)和高頻突變位點，為建立可用于臨床的快速、簡便的基因診斷方法奠定基礎；并研究中國人

3、WD患者基因高頻突變位點的基因型、基因突變類型與臨床表型的關系。
　　 方法:
　　 1.采用DHPLC 檢測來自72個不同家系的75例WD患者及其家屬樣本171例的ATP7B基因，其中包括144例雙親和27例同胞。以200名正常健康人為對照。
　　 2.收集上述WD患者的臨床資料、基因檢測結果，以ATP7B基因的第8、16 號外顯子Arg778Leu和Ile1148Thr 突變作為基因型，以錯義突變和非錯義突變

4、作為突變類型，將患者的性別、發(fā)病年齡、病程、臨床分型、首發(fā)癥狀及血清銅和血清銅藍蛋白檢測結果等臨床表型作為比較的指標，探討中國人WD患者高頻基因突變位點的基因型與臨床表型的關系。
　　 結果:
　　 1.75例WD患者ATP7B基因的21個外顯子經DHPLC 檢測出53種不同的峰形圖。
　　 2.經DNA 測序證實，75例WD患者共檢出13種多態(tài)和38種突變，包括24種錯義突變、 5種無義突變、3種剪接突變、6種

5、移碼突變。并首次報道2種新多態(tài)：
　　 1839C>T （Ile613Ile），2922G>A (Trp974Trp)，及10種新突變(200例正常對照未發(fā)現相同形式的基因型)：1875-1876dupAATT, 2120A>G （Gln707Arg），2121+3A>T，2564C>A(Ser855Tyr)，2620G>C(Ala874Ser), 2761A>C （Ser921Arg）, 3236G>T（Cys1039Phe）

6、，3244-2A>C, 3446G>A （Gly1149Glu）, 3682A>T(Arg1228stop)。
　　 3.75例WD患者突變總的檢出率為90.67％(68/75),基因突變頻率為68.67％（103/150），Arg778Leu 突變的檢出率為42.67％（32/75），染色體突變頻率為22.67％（34/150），Ile1148Thr 突變的檢出率為18.67％（14/75），染色體突變頻率為9.3％（14/1

7、50），第8、12、16 號外顯子基因突變總的檢出率為48％（72/150）。
　　 4.75例患者中，ATP7B基因突變類型與患者的血清銅和血清銅藍蛋白檢測結果無顯著性差異（P>0.05）；無Arg778Leu 突變組的血清銅水平低于Arg778Leu 雜合突變組，有顯著性差異（P=0.012），無Arg778Leu 突變組的血清銅水平低于Arg778Leu純合突變組，有顯著性差異（P=0.021）；Ile1148Thr 雜合

8、突變組的血清銅藍蛋白水平高于無Ile1148Thr 突變組，有極顯著性差異（F=32.822，P=0.000）。
　　 5. 75例患者中，Ile1148Thr、Arg778Leu、ATP7B基因突變類型與患者的性別、發(fā)病年齡、病程、臨床分型、首發(fā)癥狀等臨床表型之間均無顯著性差異（P>0.05）。
　　 結論:
　　 DHPLC是一種可用于臨床的快速、簡便的基因診斷方法；Ile1148Thr 突變是中國人WD患者