C-Cbl介導IRF3泛素化負向調(diào)控抗病毒固有免疫.pdf

1、TLR、RLR和NLR三類模式識別受體(PRR)是免疫細胞識別病原保守成分啟動固有免疫和適應性免疫的重要分子。固有免疫系統(tǒng)組成了抗病毒感染的第一道防線，機體識別入侵的病毒后， PRRs通過活化下游的信號通路啟動免疫應答，進而分泌Ⅰ型干擾素(Interferons，IFNs)清除病毒。在病毒感染中，轉(zhuǎn)錄因子IRF3(Interferonregulatory factor3)被磷酸化激活，二聚化后轉(zhuǎn)入細胞核，誘導干擾素的分泌和啟動細胞抗病毒

2、免疫反應。對IRF3翻譯后修飾的研究中，泛素化和去泛素化在調(diào)控IRF3的活性中起重要作用。本課題擬對此展開研究，期望闡明IRF3轉(zhuǎn)錄后修飾在模式識別受體介導的Ⅰ型干擾素反應中的分子機制，為病毒感染性疾病防治新方法的建立提供新的候選分子。
　　c-Cbl(Casitas B-lineage lymphoma)是細胞中的原癌基因，在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中檢測到有廣泛突變。作為E3泛素酶，c-Cbl是受體酪氨酸激酶的重要調(diào)節(jié)分子。c-Cbl

3、的TKB(tyrosine kinase binding)結(jié)構(gòu)域能夠結(jié)合受體酪氨酸激酶，c-Cbl的RING手指結(jié)構(gòu)域?qū)λ腅3酶活性起到重要作用。以前的研究表明，c-Cbl可以作為E3分子調(diào)控RIG-Ⅰ、IRF8等分子泛素化，與細胞Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生以及抗病毒反應有密切的關(guān)系。
　　我們研究發(fā)現(xiàn)c-Cbl能負向調(diào)控PRRs誘導的Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生，用特異性的c-Cbl干擾RNA下調(diào)小鼠來源的巨噬細胞c-Cbl表達，能夠促進VSV、p

4、oly(I∶C)和LPS刺激誘導的IFN-β的產(chǎn)生。利用雙熒光素酶報告基因方法，用c-Cbl篩選了細胞抗病毒信號通路上重要的節(jié)點蛋白RIG-Ⅰ、MAVS、TBK1和IRF3，結(jié)果發(fā)現(xiàn)c-Cbl能夠明顯影響IRF3蛋白的穩(wěn)定性，而未見其mRNA水平的變化。同時，我們用免疫共沉淀的方法檢測到c-Cbl與IRF3在生理狀態(tài)下能夠結(jié)合，且證實c-Cbl可以促進IRF3的K-48位泛素化及其蛋白酶體途徑的降解，從而負向調(diào)控病毒感染誘導的Ⅰ型干擾素