舒洛地特對(duì)阿霉素腎病大鼠足細(xì)胞podocalyxin、podocin、WT1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察阿霉素腎病大鼠足細(xì)胞podocalyxin、podocin、WT1表達(dá)變化，比較潑尼松、舒洛地特、潑尼松+舒洛地特對(duì)阿霉素大鼠podocalyxin、podocin、WT1表達(dá)變化的影響，為人類臨床治療腎病綜合征尋找新方法提供實(shí)驗(yàn)性理論依據(jù)。
　　方法：清潔級(jí)健康雄性10周齡SD大鼠，共60只，隨機(jī)選取48只一次性尾靜脈注射阿霉素(6.5mg/kg)方法制備阿霉素腎病模型，其余12只大鼠等容量尾靜脈注射生理鹽水，作為對(duì)照

2、組(A組)。將造模成功的48只阿霉素。腎病大鼠隨機(jī)分為模型組(B組)、潑尼松干預(yù)組(C組)、舒洛地特干預(yù)組(D組)、潑尼松+舒洛地特干預(yù)組(E組)，成模后即開(kāi)始灌胃干預(yù)，C組給予潑尼松7.5mg/kg/d，D組給予舒洛地特10mg/kg/d，E組給予潑尼松7.5mg/kg/d+舒洛地特10mg/kg/d，A組、B組每天給予等量的生理鹽水灌胃。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由飲食，不使用其他藥物。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后分別于藥物干預(yù)后4、8周末留取血及腎組織標(biāo)本

3、，前一天開(kāi)始留取24小時(shí)尿。檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白、血清白蛋白(ALb)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)、總膽固醇(TC)、總甘油三酯(TG)等指標(biāo)；腎組織石蠟切片行免疫組化染色；提取腎皮質(zhì)總RNA行RT-PCR檢測(cè)podocalyxin、podocin、WT1表達(dá)情況；于8周末留取大鼠腎皮質(zhì)行電鏡觀察腎小球超微結(jié)構(gòu)病變。組間差異性比較采用單因素方差分析或Tamhane’s檢驗(yàn)，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，顯著性水平等于0.05

4、，應(yīng)用SPSS13.0軟件包對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果：1尾靜脈注射阿霉素2周后，大鼠出現(xiàn)明顯水腫，測(cè)定24小時(shí)尿蛋白定量顯著增加，提示造模成功。應(yīng)用藥物干預(yù)后4周末C、D、E組大鼠尿蛋白定量、總膽固醇、總甘油三酯較B組顯著降低(P<0.05)，而白蛋白顯著增高，其中E組變化最為明顯；8周末C、D、E組大鼠仍有較高的尿蛋白排泄、高脂血癥及低蛋白血癥，但明顯輕于B組，其中E、D組與C組比較總膽固醇、總甘油三酯改善明顯，而E

5、、D兩組之間差異無(wú)顯著性(P>0.05)。應(yīng)用藥物干預(yù)后4周末，各組大鼠血肌酐、尿素氮無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，8周末B組大鼠血肌酐、尿素氮升高，而其余各組之間無(wú)明顯區(qū)別。
　　2模型組大鼠電鏡表現(xiàn)為足細(xì)胞足突融合、腎小球基底膜厚薄不均，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹。C、D、E組大鼠足細(xì)胞足突融合、病變程度較B組輕。E組大鼠足細(xì)胞足突輕度融合，腎小球基底膜較均勻，內(nèi)皮細(xì)胞輕度腫脹，而E組病變更輕。
　　3免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示藥物干預(yù)后4周末B、C、

6、D、E組大鼠腎組織中podocalyxin、podocin表達(dá)與A組相比均減低(P<0.05)，而各治療組與B組相比，有所恢復(fù)，E組恢復(fù)最明顯。藥物干預(yù)8周末B、C、D、E組大鼠腎組織中podocalyxin、podocin表達(dá)仍較正常組低(P<0.05)，但C、D、E組較B組表達(dá)有所恢復(fù)，E組恢復(fù)最明顯。
　　4 RT-PCR結(jié)果顯示藥物干預(yù)后4周末B、C、D、E組大鼠腎組織中podocalyxin、podocin、WT1 mR

7、NA表達(dá)水平與A組相比均減低(P<0.05)，B組減低更為明顯，而各治療組與B組相比，有所恢復(fù)。藥物干預(yù)8周末B、C、D、E組大鼠腎組織中podocalyxin、podocin表達(dá)仍較正常組低(P<0.05)，但C、D、E組較B組表達(dá)有所恢復(fù)，E組恢復(fù)最明顯。
　　結(jié)論：1在阿霉素腎病大鼠模型中，podocalyxin、podocin、WT1在足細(xì)胞表達(dá)下調(diào)，與足突融合程度及蛋白尿、腎功能受損程度一致，提示podocalyxin、