茶黃素-3,3’-雙沒(méi)食子酸酯對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制研究.pdf

1、卵巢癌是婦科三大癌癥之一，致死率一直居高不下。飲用紅茶能降低罹患卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)。紅茶是世界上消費(fèi)量最大的茶類。茶黃素是一類具有多種生理活性的紅茶多酚。近年來(lái)，茶黃素的抗癌活性成為了研究熱點(diǎn)。但是，多數(shù)現(xiàn)有研究以茶黃素混合物為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)茶黃素抗癌機(jī)理的研究并不完全，且有關(guān)茶黃素抑制卵巢癌的作用及機(jī)理的報(bào)道很少。本研究從四種茶黃素單體中篩選出一種用于評(píng)估其抗卵巢癌活性。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　1、比較了四種茶黃素單體對(duì)卵巢癌細(xì)胞OVC

2、AR-3和A2780/CP70增殖、誘導(dǎo)HUVEC管腔形成、VEGF分泌、凋亡和Caspase活性的作用。發(fā)現(xiàn)四種茶黃素單體對(duì)兩種卵巢癌細(xì)胞均有增殖抑制作用，且在相同濃度下，四種茶黃素單體對(duì)卵巢癌細(xì)胞的毒性大于對(duì)正常細(xì)胞IOSE364的毒性。四種茶黃素單體都表現(xiàn)出良好的抗血管生成活性，明顯減少癌細(xì)胞分泌VEGF。TF2A、TF2B和TF3均能誘導(dǎo)兩種卵巢癌細(xì)胞凋亡，提高Caspase-3/7、8、9活性?？偟膩?lái)看，TF2A、TF2B和T

3、F3抗卵巢癌效果比較接近，而TF1與前三者的抗癌效果差異較大、抗卵巢癌廣譜性較差。鑒于本研究所采用的茶黃素單體分離提純方法中TF3得率遠(yuǎn)大于TF2A和TF2B，且在一些紅茶中TF3的含量也大于TF2A、TF2B的含量，故選用TF3作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)材料。
　　2、研究發(fā)現(xiàn)TF3可以抑制OVCAR-3細(xì)胞誘導(dǎo)的血管生成、雞胚絨毛尿囊膜血管形成，降低OVCAR-3細(xì)胞HIF-1α表達(dá)和VEGF分泌。Western blot實(shí)驗(yàn)和熒光素酶報(bào)告

4、基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)，TF3可通過(guò)Akt/mTOR/p70S6K/4E-BP1通路和Akt/c-Myc通路抑制HIF-1α/VEGF通路。Akt抑制劑wortmannin可以增強(qiáng)OVCAR-3細(xì)胞對(duì)TF3的敏感性，而過(guò)表達(dá)Akt會(huì)降低OVCAR-3細(xì)胞對(duì)TF3的敏感性。OVCAR-3細(xì)胞還能通過(guò)Notch-1/c-Myc通路抑制HIF-1α/VEGF通路。Notch抑制劑DAPT會(huì)增強(qiáng)OVCAR-3細(xì)胞對(duì)TF3的敏感性，而過(guò)表達(dá)NICD會(huì)增強(qiáng)O

5、VCAR-3細(xì)胞對(duì)TF3的耐受性。在本實(shí)驗(yàn)中，未發(fā)現(xiàn)MAPK通路參與TF3的抗腫瘤血管生成作用。
　　3、研究發(fā)現(xiàn)TF3可以劑量依賴性增加OVCAR-3細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)Caspase-3/7、8、9活性。Western blot實(shí)驗(yàn)顯示，TF3非ATM依賴性激活Chk2、上調(diào)Bax表達(dá)、下調(diào)Bcl-xL表達(dá)、促進(jìn)PARP-1裂解，但對(duì)p53、Bad、Bcl-2、Mcl-1、Apaf-1表達(dá)無(wú)明顯影響。siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)證實(shí)，TF3通

6、過(guò)激活Chk2改變促/抗凋亡Bcl-2蛋白比例、活化Caspase-3/7和9、促進(jìn)PARP-1裂解，引起內(nèi)源性凋亡。此外，TF3還能上調(diào)OVCAR-3細(xì)胞中死亡受體Fas和DR5表達(dá)，活化Caspase-8，引起外源性凋亡。
　　4、研究發(fā)現(xiàn)TF3誘導(dǎo)OVCAR-3細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，其機(jī)理是TF3上調(diào)p27，下調(diào)CyclinD1、CDK4和p-Rb蛋白水平。
　　總之，本文從抑制增殖、減少腫瘤血管生成、促進(jìn)凋亡和