表沒食子兒茶素沒食子酸酯聯(lián)合表柔比星對膀胱癌5637細胞株生長抑制作用.pdf

1、膀胱尿路上皮癌占膀胱惡性腫瘤90％以上,而非浸潤性尿路上皮癌約占其中的70%。雖然TURBt治療非浸潤性膀胱癌后可采用膀胱灌注化療預防腫瘤復發(fā),但其術(shù)后復發(fā)率仍然偏高,而且部分非浸潤性尿路上皮癌仍有進展為浸潤性癌的可能。膀胱腫瘤高復發(fā)因素包括膀胱腫瘤多中心生長、手術(shù)導致腫瘤細胞脫落種植、殘余病灶及腫瘤多藥耐藥性(multidrug resistance,MDR),其中MDR正是膀胱腫瘤TURBt后膀胱灌注化療失敗的重要因素之一。核轉(zhuǎn)錄因

2、子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)對眾多基因起中心性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用,參與炎癥、免疫、細胞增殖、分化、凋亡、惡化、腫瘤浸潤、MDR等多種生物學過程。多數(shù)抗腫瘤藥物作用腫瘤細胞后可激活 NF-κB,使其下游基因被激活,使腫瘤細胞逃避抗腫瘤藥物的殺傷作用,從而產(chǎn)生腫瘤耐藥。表柔比星(Epirubicin, EPB)是臨床膀胱癌TURBt術(shù)后膀胱灌注化療常用藥物之一,但EPB并不能完全有效預防膀胱癌術(shù)后復發(fā)。造成膀

3、胱癌術(shù)后復發(fā)的原因可能與 EPB誘導腫瘤細胞NF-κB活化,導致腫瘤細胞出現(xiàn) MDR有關(guān)。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)為茶多酚中主要的活性成份,多項研究表明EGCG能夠抑制NF-κB的激活。本課題應用不同濃度的EGCG和/或EPB處理膀胱癌細胞系5637,觀察膀胱癌5637細胞株生長狀態(tài)變化及對NF-κB活化的影響。
　　目的:分析EGCG和EPB聯(lián)用對高危非浸潤性膀胱

4、癌細胞系5637生物學行為的作用效果及NF-κB的影響,探討兩藥聯(lián)合對膀胱癌細胞的毒性協(xié)同作用及分子機制,為進一步指導臨床膀胱癌治療提供新的思路及理論依據(jù)。
　　方法:選用高危非浸潤性膀胱癌5637細胞株作為研究對象。應用5~100μg/ml EGCG、1~50μg/ml EPB、EGCG(10μg/ml)和EPB(1μg/ml)聯(lián)用處理高危非浸潤性膀胱癌細胞系563724h后,MTT法檢測細胞活性;流式細胞儀(flow cyto

5、meter,FCM)法檢測細胞凋亡;細胞免疫組化、Western免疫印跡法及免疫熒光激光共聚焦法檢測細胞質(zhì)及細胞核中NF-κB的表達。
　　結(jié)果:
　　(1)MTT法檢測結(jié)果顯示EPB、EGCG隨藥物濃度的增高,對膀胱癌5637細胞株生長抑制率逐漸增高。聯(lián)合應用兩藥后對膀胱癌5637細胞生長抑制率較相同濃度單用藥物組有明顯增高(P<0.05)。當1μg/ml EPB聯(lián)合10μg/mlGCG時兩藥呈現(xiàn)出協(xié)同作用(Q>1.15)

6、,組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　(2)FCM顯示1μg/ml EPB聯(lián)合10μg/ml EGCG時對膀胱5637細胞促凋亡作用大于單用1μg/ml EPB或10μg/ml EGCG(P<0.05)。
　　(3)細胞免疫組化、Western免疫印跡法及激光共聚焦法顯示1μg/ml EPB作用后細胞質(zhì)中NF-κB減少,細胞核中NF-κB增加,當與10μg/ml EGCG聯(lián)合應用時,NF-κB的細胞核內(nèi)表達量顯著下降